论文摘要
运用高密度寡核苷酸芯片研究了大鼠胰腺不同发育阶段（胚胎（E）12.5,E15.5,E18.5,新生和成年）的基因表达谱,经过生物信息学数据分析发现,许多已经报道过的参与胰岛细胞发育和分化的基因例如:Pdx1、Ngn3、Pax4等在E12.5或E15.5高表达,这与以往的报道相一致;而与胰岛功能相关的基因在E18.5相对高表达,这与胚胎发育后期胰岛功能趋于完善和成熟的发育过程相符;而典型的胰岛结构是胰岛发挥正常生物学功能的基础,这个时期也正是胰岛细胞迁移、聚集形成典型胰岛结构的关键阶段,我们检测到一些参与细胞迁移的黏附分子在E18.5高表达,其中有些基因是已经报道过的参与胰岛细胞的迁移和黏附,而有些基因在胰腺发育过程中尚未见报道,例如黏附分子Mesothelin,本研究从核酸和蛋白两个方面对Mesothelin基因在胰腺发育不同阶段的表达和定位进行研究,并初步探讨该基因在胰腺发育过程中的生物学功能。运用RT-PCR技术进一步验证Mesothelin基因在大鼠胰腺发育不同阶段的mRNA表达水平:在E15.5表达量很低,至E18.5明显升高,到生后14天（P14）表达量达到高峰,然后下降,至成年表达量较低。这与基因芯片中检测到的Mesothelin基因的表达趋势一致;Westernblot检测Mesothelin蛋白在大鼠胰腺发育不同阶段的表达丰度,发现蛋白的表达趋势与mRNA的表达趋势完全相同。用免疫荧光组织化学进行定位研究发现,Mesothelin既与Insulin共表达于胰岛β细胞,又与Vimentin共表达于间充质细胞。最后我们运用实时荧光定量PCR技术对Mesothelin上游基因Wnt-5a在胰腺发育过程中的表达进行检测,发现其表达趋势与Mesothelin的表达趋势相反。实验结果显示,Mesothelin高表达的时期与胰岛结构形成和重塑的发育阶段正好相符,而且定位于内分泌细胞,因此,我们推测黏附分子Mesothelin可能调控胰腺胚胎发育后期胰岛细胞的迁移、聚集、黏附及胰岛结构的形成,并参与出生后胰岛结构重塑的过程,其作用的发挥可能受上游因子Wnt-5a的调控,同时表达Mesothelin的胰腺间充质细胞可能是内分泌细胞的一个新的来源。
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标签：胰岛结构形成论文; 胰岛结构重塑论文; 细胞迁移黏附论文; 免疫组织化学论文; 高密度寡核苷酸芯片论文;