甘草提取液对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

论文摘要

背景及目的：糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN; diabetic kidney disease,DKD）是糖尿病（diabetes mellitus, DM）常见的慢性微血管并发症之一,也是导致终末期肾病（end stage renal disease, ESRD）的常见病因。因此探寻DN的发病机制和寻找早期防治药物有非常重要的临床意义和社会价值。DN的发病机制至今仍未完全阐明,近十余年随着研究的不断深入,发现DN是在遗传背景基础上糖脂代谢紊乱、血流动力学改变、氧化应激、炎症、细胞因子、生长因子等多因素综合作用的结果。既往研究证实,甘草具有抑制α-葡萄糖苷酶、降低血糖、抑制醛糖还原酶（AR）活性、抗氧化、抗炎等药理作用,对肾功能有保护作用,但有关甘草对糖尿病微血管并发症如糖尿病肾病的药理作用及其机制的研究报道较少。为此,本研究应用腹腔注射链脲佐菌素的方法复制大鼠糖尿病肾损伤模型,观察甘草提取液对糖尿病肾损伤大鼠肾功能的保护作用,并从调节肾脏AR活性、抗氧化应激、抗炎方面探讨甘草提取液抗糖尿病大鼠肾损伤、保护肾功能的作用机制。方法：1.制备甘草提取液。2.分光光度法测定甘草提取液α-葡萄糖苷酶抑制活性。3.糖尿病大鼠模型的建立及实验动物分组：雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后,禁食12h,将链脲佐菌素（STZ）溶解于0.1mmol/L枸橼酸钠缓冲液（pH4.5）,按65mg/kg腹腔内一次性注射STZ制作DM大鼠模型,共有32只大鼠成模；成模大鼠随机分为模型组和治疗组,每组16只,治疗组给予甘草提取液灌胃1次/d,每次1mL/100g体质量,连续10周；另有16只正常Wistar大鼠为对照组。4.检测指标：于实验第2、4、6、8、10周末测定各组大鼠体重、葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（FBG）、考马斯亮兰法测定24h尿白蛋白量。于第10周末测定各组大鼠的肾质量指数（KI）、亲和层析法测定糖化血红蛋白（GHbAlc）、速率法测定尿、血肌酐（Scr）及血尿素氮（BUN）、高效液相色谱（HPLC）法测定血清胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）、硫代巴比妥酸法测定血液及肾组织匀浆中丙二醛（MDA）含量、黄嘌呤氧化酶法测定血液及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性、比色法测定血液及肾组织匀浆中硒谷胱甘肽过氧化物酶（SeGSHPx）活性、DL-甘油醛-NADPH-荧光分光光度法测定红细胞及肾组织匀浆中醛糖还原酶（AR）活性、双抗体夹心ELISA法测定24h尿单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）含量、计算内生肌酐清除率（Ccr）。常规保存肾组织,组织切片,HE染色,光镜下观察肾组织形态学变化,免疫组织化学法观察肾脏组织MCP-1的阳性表达。结果：1.甘草提取液对α-葡萄糖苷酶活性抑制率为52.17%。2.动物造模10周后,测模型组及治疗组DM大鼠KI、FBG、GHbAlC、TC、TG、Scr、BUN、Ccr、24h尿白蛋白量、24h尿MCP-1量、血液及肾组织匀浆中MDA含量、AR活性均明显高于对照组（P均<0.05）,SOD、SeGSHPx活性均明显低于对照组（P均<0.05）。3.与模型组相比,治疗组KI、FBG、GHbAlC、TC、TG、Scr、BUN、Ccr、24h尿白蛋白量、24h尿MCP-1量、血液及肾组织匀浆中MDA含量、AR活性均显著降低（P均<0.05）,SOD、SeGSHPx活性均显著升高（P均<0.05）。4.光镜下对照组肾组织未见明显改变,模型组肾小球体积和肾小球系膜面积都显著增加,肾小管肿胀,部分肾小管上皮细胞空泡变性,肾间质局灶炎性分布伴有淋巴细胞浸润,治疗组肾组织病变程度较模型组显著减轻。免疫组化显示MCP-1阳性细胞胞浆染色为棕黄色。对照组肾脏组织未见MCP-1表达或仅有微量表达,模型组肾小球毛细血管袢、系膜区及肾小管MCP-1阳性表达显著增加,治疗组肾小球毛细血管袢、系膜区及肾小管MCP-1阳性表达明显减弱（P均<0.05）。结论：1.甘草提取液具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,可以降低DN大鼠血糖,调节脂代谢,减少尿蛋白。2.甘草提取液可以抑制DN大鼠肾脏组织的氧化应激。3.甘草提取液可以抑制DN大鼠红细胞及肾脏组织醛糖还原酶活性。4.甘草提取液可以减少DN大鼠肾脏促炎症因子MCP-1的表达,抑制肾组织炎症反应。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 α-葡萄糖昔酶活性抑制率
• 3.2 各组大鼠一般状况的变化
• 3.3 各组大鼠FBG和GHAblc的变化
• 3.4 各组大鼠24h尿白蛋白、Scr、BUN、Ccr的变化
• 3.5 各组大鼠血清胆固醇、甘油三醋的变化
• 3.6 各组大鼠氧化应激指标MDA含量、SOD、SeGSHPx活性的变化
• 3.7 各组大鼠醛糖还原酶活性的变化
• 3.8 各组大鼠肾脏病理的变化
• 3.9 各组大鼠尿-Pc-1及肾脏组织中MCP-1的表达
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 附图表
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表