NBD-F衍生剂光谱学特性及其在高效液相色谱中的应用研究

论文摘要

目的苯并呋咱（benzofurazan）类衍生剂是一类已广泛应用于生物样品测定的衍生剂,能与氨基酸、多肽及部分蛋白质发生衍生反应,生成的衍生物可用紫外或荧光检测器进行检测。本文通过研究苯并呋咱类衍生剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑（4-fluoro-7-nitrobenzofurazan,NBD-F）的光谱学特性及量子产率,优化了NBD-F与待测物衍生反应条件,建立一种简便、快速、灵敏的高效液相色谱测定保健食品或生物样品中牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐的方法。方法与结果使用分光光度计测定了NBD-F及其衍生产物的紫外可见吸收光谱、荧光光谱性质和量子产率,发现NBD-F在碱性条件下,可激发波长为370nm,475nm,发射波长为540nm处产生较强的荧光。在0.1-100μmol/L浓度范围时,荧光强度与浓度存在线性关系。以罗丹明B为参比,测得NBD-F在激发波长475nm处荧光量子产率为0.86。NBD-F柱前衍生高效液相色谱紫外检测器测定保健食品中牛磺酸含量,荧光检测器测定人、大鼠血浆中和大鼠肝、脑组织中牛磺酸含量。色谱条件为：色谱柱Diamonsil C18柱（5μm,250 x4.6 mm）；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（0.02mol/L, pH 6.0）（16：84,v/v）；柱温25℃；流速1.0 ml/min;紫外检测波长λ=470 nm；荧光检测器λex=475nm,λem=536nm;进样量10μL。结果荧光检测牛磺酸线性范围为0.1μmol/L-30.0μmol/L,r=0.9995,最低检测限（S/N=3）0.010μmol/L,日内和日间变异分别为5.3%,7.7%。将此方法用于测定生物样品中牛磺酸含量测定正常男女血浆中牛磺酸含量分别为37.8±5.1,38.1±5.5μmol/L,正常大鼠血浆中牛磺酸含量为263±24μmol/L,正常大鼠肝、脑中牛磺酸含量分别为1.3±0.2,1.9±0.1μmol/g。柱前衍生高效液相色谱测定生物样品中谷胱甘肽的含量,使用乙腈-0.02mol/L磷酸盐溶液（23：77,v/v）为流动相,柱温25℃;流速1.0 mL/min;荧光检测：λex=475 nm,λem=542 nm;进样量10μL。荧光检测谷胱甘肽线性范围为0.1μmol/L-10.0μmol/L,r=0.9988日内和日间变异分别为6.3%,6.9%。将此方法用于测定生物样品中谷胱甘肽含量,测定正常男女血浆中牛谷胱甘肽含量分别为4.70±0.92,4.72±0.94μmol/L,测定正常组和肝性脑病组大鼠血浆中谷胱甘肽值分别为5.70±1.01,3.42±0.54μmol/L,正常大鼠肝、脑中谷胱甘肽含量分别为5.46±0.62,0.63±0.10μmol/g。柱前衍生高效液相色谱法测定保健食品中氨基葡萄糖盐酸盐的含量,色谱条件为：DiamonsilC18 250x4.6mm,5μm；流动相：乙腈-0.02mol/L KH2PO4 （0.05%TFA,pH 4.0）=32：68（v/v）,柱温：35℃,流速：1.0 ml/min,检测波长：466nm,进样体积10μL。线性范围是1.0-500 mg/L,相关系数为0.9995,最低检测限（S/N=3）为0.20mg/L,样品的回收率为95.6%-103.7%,相对标准偏差为2.5%-7.7%。结论本文研究了苯并呋咱类衍生剂NBD-F光谱学特性,优化了NBD-F与牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐衍生反应的条件,并对衍生产物的吸收光谱、稳定性等特征进行考查。结果表明NBD-F是一种较强的荧光标记物,能与含胺基化合物在碱性条件下发生衍生化反应,衍生反应条件简单,反应时间短,衍生产物的稳定好,可用高效液相色谱紫外检测器或荧光检测器测定,干扰峰少,灵敏度高。此方法可以用于测定食品和生物样品中牛磺酸、谷胱甘肽、氨基葡萄糖盐酸盐含量。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 实验部分
• NBD-F光谱学研究
• 牛磺酸的测定
• 谷胱甘肽含量的测定
• 葡萄糖盐酸盐的测定
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表