夏枯草中两种三萜酸的分离测定研究

论文摘要

论文在调研大量文献的基础上,以夏枯草（Prunella Vulgaris L.）中三萜类药用成分为目标,研究了湖北产夏枯草中齐墩果酸（Oleanolic acid,简称OA）和熊果酸（Ursolic acid,简称UA）的提取、分离纯化及测定方法,并对所得的熊果酸单体通过UV、IR、1HNMR、13CNMR等分析手段进行了结构表征。具体内容如下:（1）齐墩果酸和熊果酸的提取。运用正交设计得到了溶剂提取法提取夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的最佳实验条件:在85℃下,用95%（v/v）乙醇溶液提取两次,第一次2h,第二次1h,料液比为1:15,夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的提取量分别达到1.24 mg/g和2.45 mg/g。与溶剂提取法相比,超声提取耗时短,但提取量较低。（2）齐墩果酸和熊果酸的分离纯化。选择溶剂萃取法和酸碱沉淀法对夏枯草提取液进行初步纯化,而后通过硅胶柱层析和重结晶对粗产品进行精制,得到A、B两种产品。产品A中熊果酸的纯度由上柱前的28.58%上升到90.30%,收率为25.10%;产品B中齐墩果酸和熊果酸的总含量为92.15%,收率为24.81%。另外,尝试通过X-5型大孔吸附树脂富集纯化两种三萜酸,最终产品中两者共存,总含量为83.30%,收率为70.10%。（3）齐墩果酸和熊果酸的测定和结构表征。采用RP-HPLC对夏枯草提取液和分离纯化中间产物进行定量分析。通过实验确定分析条件为:色谱柱,Hedera ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相,甲醇-水-冰醋酸（85:15:0.2）;流速,0.8 mL/min;检测波长,λ=210 nm;进样量,10μL;柱温,30℃。齐墩果酸和熊果酸分别在18-360μg/mL和19.5-390μg/mL范围内线形关系良好。采用UV、IR、1HNMR、13CNMR等分析手段确定从夏枯草中分离得到的产品A为熊果酸单体。（4）齐墩果酸和熊果酸的毛细管电泳分离。建立了羟丙基-β-环糊精修饰、同时分离齐墩果酸和熊果酸的毛细管胶束电动色谱法,并且测定了夏枯草中两种异构体的含量。以pH为9.0的10 mmol/LNa2B4O7-10 mmol/L NaH2PO4-50 mmol/L SDS-15mmol/L HP-β-CD-6%（v/v）甲醇作为背景电解质溶液,15 min内实现了两种待测组分的基线分离,并与高效液相色谱手性流动相添加剂法做了相应的比较。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 夏枯草分布及形态特征
• 1.3 夏枯草化学成分
• 1.3.1 三萜及其苷类
• 1.3.2 苯丙素类
• 1.3.3 甾醇及其苷类
• 1.3.4 黄酮类
• 1.3.5 香豆素
• 1.3.6 有机酸
• 1.3.7 挥发油
• 1.3.8 糖类
• 1.4 夏枯草药理作用
• 1.4.1 降压作用
• 1.4.2 降血糖作用
• 1.4.3 抗菌作用
• 1.4.4 抗病毒作用
• 1.4.5 抗炎及抗过敏作用
• 1.4.6 抗突变、抗致癌作用
• 1.5 齐墩果酸与熊果酸的理化性质及药理作用
• 1.5.1 预防和抗癌作用
• 1.5.2 保肝、解肝毒和治疗肝炎作用
• 1.5.3 抑菌和抗病毒作用
• 1.5.4 对艾滋病病毒的抑制作用
• 1.5.5 对中枢神经系统的作用
• 1.5.6 降糖、降脂作用
• 1.5.7 抗胃溃疡作用
• 1.5.8 其他作用
• 1.6 齐墩果酸和熊果酸的提取工艺研究
• 1.6.1 回流提取法
• 1.6.2 微波辅助提取法
• 1.6.3 超临界流体萃取法
• 1.6.4 超声波提取法
• 1.7 齐墩果酸和熊果酸的分离纯化研究
• 1.7.1 溶剂萃取
• 1.7.2 大孔吸附树脂
• 1.7.3 硅胶柱层析
• 1.8 齐墩果酸和熊果酸的分析测定研究
• 1.8.1 薄层色谱法
• 1.8.2 可见光分光光度法
• 1.8.3 气相色谱
• 1.8.4 高效液相色谱
• 1.8.5 毛细管电泳
• 1.8.6 其它分析测定方法
• 1.9 课题研究的意义和内容
• 第二章 夏枯草中齐墩果酸与熊果酸的提取
• 2.1 溶剂回流提取法原理
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 仪器和试剂
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 提取条件的单因素实验
• 2.3.2 正交实验结果与分析
• 2.3.3 回流提取与超声波提取方法的比较
• 2.3.4 小结
• 第三章 夏枯草中三萜酸类化合物的纯化工艺研究
• 3.1 溶剂萃取法
• 3.1.1 溶剂萃取法的基本原理
• 3.1.2 实验部分
• 3.1.3 结果和讨论
• 3.2 酸碱沉淀法
• 3.2.1 酸碱沉淀法原理
• 3.2.2 实验部分
• 3.2.3 酸碱沉淀法的二次回归正交设计优化
• 3.3 硅胶柱层析-重结晶分离纯化三萜酸
• 3.3.1 硅胶柱层析原理简述
• 3.3.2 实验部分
• 3.3.3 结果与讨论
• 3.3.4 制备液相色谱方法的尝试
• 3.3.5 小结
• 第四章 大孔吸附树脂分离富集夏枯草中三萜酸的研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 仪器和试剂
• 4.1.2 大孔吸附树脂的预处理
• 4.1.3 夏枯草样品的制备
• 4.1.4 大孔吸附树脂筛选
• 4.1.5 静态吸附实验
• 4.1.6 动态吸附容量的测定
• 4.1.7 动态吸附和动态解吸实验
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 树脂筛选结果
• 4.2.2 吸附溶剂的选择
• 4.2.3 静态吸附动力学过程
• 4.2.4 静态吸附等温线
• 4.2.5 动态吸附容量的测定
• 4.2.6 上柱液的pH值对树脂吸附量的影响
• 4.2.7 上柱液的浓度考察
• 4.2.8 上柱液的流速对树脂吸附量的影响
• 4.2.9 洗脱剂的选择
• 4.2.10 动态解吸洗脱液流速的影响
• 4.2.11 动态吸附洗脱验证
• 4.3 小结
• 第五章 夏枯草中三萜酸的测定和结构表征
• 5.1 高效液相色谱法同时测定齐墩果酸和熊果酸
• 5.1.1 实验部分
• 5.1.2 结果与讨论
• 5.2 产品A的结构表征
• 5.2.1 紫外光谱表征
• 5.2.2 红外光谱表征
• 5.2.3 核磁共振波谱表征
• 第六章 环糊精修饰毛细管胶束电动色谱分离三萜酸
• 6.1 实验部分
• 6.1.1 仪器和试剂
• 6.1.2 对照品溶液的制备
• 6.1.3 样品溶液的制备
• 6.2 结果与讨论
• 6.2.1 分离条件的优化
• 6.2.2 标准曲线及线性范围
• 6.2.3 精密度实验和检出限、定量限的测定
• 6.2.4 样品分析
• 6.2.5 毛细管电泳与液相色谱方法的比较
• 6.3 小结
• 总结及展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果