同种反应性NK细胞在造血干细胞移植中作用的临床及实验研究

论文摘要

【目的】1.研究供者KIR和供受者HLA配体对单倍体造血干细胞移植（HSCT）预后的影响;2.研究供者KIR和受者HLA配体对同胞HLA相合HSCT预后的影响;3.探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中移植物和移植后一个月患者外周血NK细胞和T细胞上四种抑制型受体（CD158a、CD158b、NKB1及CD94/NKG2A）的表达与造血重建及急性移植物抗宿主病（aGVHD）的关系;4.研究同种反应性NK细胞用于小鼠单倍体骨髓移植（BMT）中的抗白血病（GVL）作用;5.探讨同种反应性NK细胞对小鼠单倍体BMT免疫重建的可能有益作用。【方法】1.采用特异性序列引物聚合酶链反应（PCR-SSP）方法进行供者KIR及供受者HLA-Cw基因分型;2.流式细胞仪检测NK及T细胞上四种抑制型受体的表达;3.免疫磁珠分选法制备供鼠NK细胞及同种反应性NK细胞;4.建立C57BL/6×BALB/c（BCF1）→BALB/c小鼠（荷EL9611红白血病）单倍体BMT模型,观察同种反应性NK细胞的GVL作用;5.应用C57BL/6×BALB/c（BCF1）→BALB/c小鼠单倍体BMT模型,观察同种反应性NK细胞对免疫重建的可能影响:胸腺病理组织学观查;流式细胞仪检测外周血CD3e的表达;脾细胞增殖实验;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定外周血血清及脾细胞培养上清IL-4、IFN-γ浓度。【结果】1.在单倍体HSCT中,供者KIR2DS3、KIR3DS1显著延迟中性粒细胞重建,同时KIR3DS1显著延迟血小板重建;KIR2DS1、KIR2DS3、KIR3DS1显著降低慢性GVHD（cGVHD）;受者HLA-Bw4阳性显著增加aGVHD发生率（以上各组与相应组比较,P均＜0.05）;GVH方向HLA配体不合组与相合组、KIR受体—HLA配体不合组与相合组比较,造血重建、DFS、复发、TRM没有显著性差别（P均＞0.05）。2.在同胞HLA相合HSCT中,供者KIR2DS5显著延迟中性粒细胞重建;KIR2DS2显著增加aGVHD和CMV病毒血症的发生率（P均＜0.05）;C1纯合组与C1/C2杂合组相比,cGVHD发生率显著降低,而且4例广泛型cGVHD均发生在C1/C2杂合组,同时C1纯合组败血症/肺感染的发生率显著降低（P均＜0.05）;KIR受体—HLA配体不合组DFS显著高于相合组[移植后600天DFS分别为（88.89±7.41）%、（53.85±13.83）%,P＜0.05],同时不合组复发率有低于相合组的趋势（P=0.08）。3.移植物NK细胞上CD158a、NKB1、CD94/NKG2A的表达在Ⅱ～Ⅳ度aGVHD组明显高于0～Ⅰ度aGVHD组;而CD8+T细胞上CD94/NKG2A的表达在0～Ⅰ度aGVHD组明显高于Ⅱ～Ⅳ度aGVHD组（P均＜0.05）。4.同种反应性NK细胞显著延长接受单倍体BMT的荷白血病BALB/c小鼠的生存期,降低复发率（与非同种反应性NK细胞组和单纯BMT组比较,P均＜0.05）。5.同种反应性NK细胞促进单倍体BMT小鼠的外周T细胞免疫重建,体内有效诱导Th1型免疫反应的偏移。【结论】1.在单倍体HSCT中,供者激活型KIR2DS3、KIR3DS1延迟造血重建,KIR2DS1、KIR2DS3、KIR3DS1降低cGVHD;受者Bw4增加aGVHD;GVH方向HLA配体是否相合、KIR受体—配体是否相合对造血重建、DFS均无显著影响。2.在同胞HLA相合HSCT中,供者激活型KIR2DS5延迟造血重建,KIR2DS2增加aGVHD和CMV病毒血症的发生;C1纯合状态降低cGVHD发生率和严重程度,降低感染;KIR受体—HLA配体不合可能降低复发,改善DFS。3.Allo-HSCT中移植物中NK细胞高表达CD158a、NKB1、CD94/NKG2A时增加Ⅱ-Ⅳ度aGVHD,而CD8+T细胞上高表达CD94/NKG2A降低Ⅱ-Ⅳ度aGVHD。4.同种反应性NK细胞用于单倍体BMT的荷白血病BALB/c小鼠,延长生存期,降低复发率,具有GVL的作用。5.同种反应性NK细胞促进单倍体BMT小鼠的外周T细胞免疫重建,体内有效诱导Th1型免疫反应的偏移。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章
• 前言
• 材料
• 病例和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二章
• 前言
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 论文综述
• 致谢
• 附录