骨髓间充质干细胞与珊瑚羟基磷灰石复合自体肌肉内移植成骨的实验研究

论文摘要

目的探讨兔骨髓间充质干细胞（MSCs）体外分离、培养、扩增和鉴定的方法体系;实验观察珊瑚羟基磷灰石（CHA）复合兔MSCs的生物相容性及诱导成骨能力,并评价其构建组织工程骨的可行性及临床应用价值。方法1兔骨髓间充质干细胞（MSCs）体外分离、培养、扩增和鉴定。穿刺抽取兔髂骨骨髓,用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合,分离兔骨髓间充质干细胞,进行体外培养扩增,绘制其生长曲线,计算倍增时间,测定细胞贴壁率,用倒置显微镜观察细胞的生物学性状。通过免疫荧光组织化学鉴定细胞,了解其部分表型特点。行统计学分析,假定P<0.05有统计学意义。2兔MSCs复合CHA自体肌肉内异位成骨能力的实验研究。取生长良好的第三代细胞,将其诱导转化成为成骨细胞,接种于盘状CHA上,自体移植于兔背部肌肉内,同时植入单纯的CHA作为对照。植入4、8周后取材,形态学观察（光学显微镜）其新骨形成情况。结果1分离培养的细胞贴壁生长,呈梭形,细胞增殖能力强,原代细胞呈集落生长,12-15天达到融合,传代后增殖速度加快,平均倍增时间为34h,随传代次数的增加细胞的增殖能力有所下降,1、3、5代细胞接种12h后贴壁率在90%以上。骨髓MSCs均一表达CD44,而不表达CD34。2植入兔体内的成骨细胞/CHA复合物,在不同的时间段,都观察有新骨形成。阴性对照组未发现骨组织形成。结论1密度梯度离心与贴壁培养相结合,可有效分离和扩增骨髓MSCs;分离培养的骨髓MSCs生长稳定,增殖力强,可选用前5代传代细胞作为骨组织工程的种子细胞;细胞表面标志CD34阴性、CD44阳性可作为鉴定骨髓间充质干细胞（MSCs）的一种方法。2成骨细胞/CHA复合物具有异位成骨作用,显示出良好的应用前景;CHA具有良好的生物兼容性和多孔网状结构,可以作为支架材料用于构建组织工程骨。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 兔骨髓间充质干细胞体外分离、培养及鉴定
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 主要试剂和仪器
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 骨髓间充质干细胞的分离
• 2.1.4 兔 MSCs 细胞的培养
• 2.1.5 兔骨髓间充质干细胞的生物学特性观察
• 2.1.6 统计学处理
• 2.2 结果
• 2.2.1 原代培养
• 2.2.2 传代培养
• 2.2.3 MSCs 体外培养生长曲线的测定
• 2.2.4 传代细胞贴壁率
• 2.2.5 骨髓 MSCs 表面标记物
• 2.3 讨论
• 2.3.1 MSCs 的分离与提纯
• 2.3.2 MSCs 的鉴定
• 2.4 结论
• 第3章 兔成骨细胞/CHA 复合物自体肌肉内移植异位成骨的实验研究
• 3.1 实验材料和方法
• 3.1.1 主要试剂和仪器
• 3.1.2 实验动物
• 3.1.3 珊瑚羟基磷灰石
• 3.1.4 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 实验动物情况
• 3.2.2 组织学观察
• 3.3 讨论
• 3.3.1 骨缺损的修复研究现状及存在的问题
• 3.3.2 CHA 的免疫问题
• 3.3.3 体外培养细胞的免疫问题
• 3.3.4 异位成骨问题
• 3.4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果