论文摘要
目的观察脑缺血诱导的ER应激对stresslin表达的影响,并确定表达stresslin的神经细胞类型。方法采用大脑中动脉阻塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion ,MCAO)建立大鼠脑缺血再灌注模型;采用HE染色,免疫组织化学,免疫荧光双标法研究正常大鼠脑中stresslin表达与分布。原代培养胎鼠神经元,用Tunicamycin诱导内质网应激,并用细胞免疫化学法观察stresslin表达与内质网应激的关系。表达和纯化人重组tau蛋白,观察tau是否能诱导原代培养的神经元表达stresslin。结果1.正常大鼠脑中stresslin的表达及分布正常大鼠脑中,stresslin在多个脑区如皮层、海马、丘脑、下丘脑、黑质、杏仁核均有少量表达,主要定位于胞浆。比较8只灌注大鼠和8只非灌注大鼠stresslin的表达与分布,发现取材过程对stresslin表达与分布无明显影响。比较8只雌鼠和8只雄鼠stresslin的表达与分布,发现性别对stresslin表达与分布无明显影响。比较8只普通级和8只SPF级大鼠stresslin表达与分布,发现普通级大鼠stresslin表达要比SPF级大鼠表达的多,但差异无显著性。2.脑缺血再灌注诱导的stresslin表达及分布在单侧MCAO模型上,缺血0.5 h再灌注1 h即出现同侧海马stresslin表达的增多;缺血2 h再灌注2 h,下丘脑区细胞及下连合器室管膜细胞中stresslin的表达呈强阳性;在缺血4h再灌注分别为12 h、24 h、36 h、48 h、72 h模型上,stresslin在皮层、海马、丘脑、下丘脑、黑质、杏仁核等脑区的表达都明显上调。随着缺血/再灌注时间的延长,stresslin表达量呈增加趋势。3. stresslin表达的细胞类型分别用神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞特异性抗体与stresslin抗体进行免疫荧光双标染色,发现stresslin表达的细胞类型较广泛,不仅在神经元中大量表达,在上述三种胶质细胞也有表达。另外,在下连合器室管膜细胞中表达明显。4.脑缺血再灌注诱导的内质网应激在大鼠脑缺血再灌注模型上,发现脑缺血部位神经细胞中内质网应激标志性蛋白质CHOP表达量增多,提示脑缺血再灌注诱导了神经细胞发生内质网应激。在该研究中,除了观察到已报道的CHOP细胞内分布形式外,我们还发现在非正常状态下,CHOP可以有胞浆分布。且在某些情况下,stresslin和CHOP二者有很好的共定位。同时还发现,CHOP对缺血的敏感性不及stresslin。5. NeuN与stresslin表达之间的关系NeuN是标志神经元核的特异性蛋白,在大鼠脑缺血再灌注模型上,NeuN阳性的神经元数量较正常大鼠明显减少。而在stresslin表达明显的神经元内,NeuN的表达量降低或阴性,提示stresslin和NeuN的表达呈负相关。6.脑缺血再灌注诱导了胶质细胞的激活在大鼠脑缺血再灌注模型上,海马、丘脑、下丘脑等多个脑区出现胶质细胞的激活,包括小胶质细胞的浸润、聚集和CD68的诱导表达以及胶质细胞特异性抗体GFAP的表达明显增多等,提示脑缺血再灌注诱导了胶质细胞的激活。7.内质网应激诱导原代培养神经元细胞stresslin的表达在原代培养的神经元中,未见stresslin表达。当用Tunicamycin诱导细胞内质网应激,发现细胞胞浆内stresslin的表达增多,同时伴有CHOP的表达。用重组的人tau蛋白处理原代培养的神经元,也可导致细胞胞浆内stresslin的表达增多和CHOP表达的增多。提示内质网应激刺激诱导原代培养的神经元表达stresslin。结论(1)脑缺血再灌注诱导了内质网应激及stresslin表达,大鼠脑中多种神经细胞均可表达stresslin,包括神经元、胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞及室管膜细胞。(2) CHOP在脑缺血再灌注诱导的内质网应激中有多种表现形式。(3)重组的人tau蛋白可诱导神经元内质网应激及stresslin表达。