复方紫金肝泰抗HBV物质基础的研究

论文摘要

复方紫金肝泰是由紫红獐牙菜（Swertia punicea Hemsl）和鸡内金组方研究而成的中药新药，以紫红獐牙菜为君药。为了阐明复方紫金肝泰治疗乙型肝炎的物质基础，本课题从体外抗乙型肝炎病毒（HBV）活性方面对紫红獐牙菜的有效部位、活性成分和鸡内金的有效酶解产物进行了较系统的研究，并建立了紫红獐牙菜及其近缘种中多种活性成分含量测定的方法以及紫红獐牙菜药材的指纹图谱。 将紫红獐牙菜乙醇提取物（SP）分散于水中，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯分别萃取，得到石油醚提取物（F1-SP）、乙醚提取物（F2-SP）、乙酸乙酯提取物（F3-SP）和水溶性部位（F4-SP），再用AB-8型大孔吸附树脂富集水溶性部位中的苷类等成分，得纯化后的水溶性部位（F4′-SP）。用乙型肝炎病毒（HBV）DNA转染人肝癌细胞（HepG2）的2215细胞系筛选有效部位，以观察细胞病变（CPE）为指标测定药物毒性，用固相放射免疫法（RIA法）测定2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg。其中水溶性部位（F4-SP、F4′-SP）毒性较小，两者TC50均大于2000μg／ml；乙酸乙酯提取物（F3-SP）为体外抗HBV的有效部位，其对HBsAg、HBeAg的半数毒性浓度(IC50)分别为58μg／ml、100μg／ml，选择指数（SI）分别为12.2、7.1，并且多数浓度组对HBsAg、HBeAg抑制率与细胞对照组比较均有显著性差异（P＜0.05）。从而筛选出紫红獐牙菜抗HBV的有效部位。 从F4′-SP进一步分离得到4个单体化合物，经理化性质和UV、IR、1HNMR、13CNMR、HMQC、HMBC及MS等波谱数据分析，分别鉴定为芒果苷（mangiferin，1，3，6，7-四羟基口山酮-2-C-β-吡喃葡萄糖苷，Ⅰ）、獐牙菜苦苷（swertiamarin，Ⅱ）、当药醇苷（swertianolin，8-0-β-D-吡喃葡萄糖-1，5-二羟基-3-甲氧基（?）酮，Ⅲ）及葡萄糖（glucose，Ⅳ）。从F3-SP进一步分离得到5个单体化合物，分别鉴定为1，7，8-三羟基-3-甲氧基（?）酮（swertianin，Ⅴ）、1，7-二羟基-3，8-2-甲氧基（?）酮（Ⅵ）、1，5，8-三羟基-3-甲氧基（?）酮（bellidifolin，Ⅶ）、5-0-β-D-吡喃葡萄糖-1，8-二羟基-3-甲氧基（?）酮（Ⅷ）及齐墩果酸（oleanolic acid，Ⅸ），其中化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ为首次从紫红獐牙菜植物中得到。化合物Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ对培养8d的2215细胞的HBsAg表达有抑制作用，IC50如分别为432μg／ml、30μg／ml、13μg／ml、12.4μg／ml，SI分别为1.16、2.1、6.8、14.2；化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅷ对2215细胞的HBeAg表达有抑制作用，IC50分别为88.5μg／ml、8.0μg／ml、8.72μg／ml、18.67μg／ml，SI分别为4.5、6.2、2.36、6.76。以上化合物对2215细胞DNA均无明显的抑制作用。从而确定了紫红獐牙菜抗

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 紫红獐牙菜体外抗HBV有效部位的研究
• 1 紫红獐牙菜不同部位的提取分离
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 不同部位的提取分离
• 2 紫红獐牙菜体外抗HBV有效部位的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 药物对2215细胞的毒性
• 2.2.2 药物在2215细胞培养中对HBsAg、HBeAg表达的作用
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 紫红獐牙菜化学成分及体外抗HBV活性研究
• 1 紫红獐牙菜化学成分的研究
• 1.1 仪器与试药
• 1.2 化学成分的分离
• 1.3 结构鉴定
• 2 紫红獐牙菜体外抗HBV活性成分的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 药物对2215细胞的毒性
• 2.2.2 药物在2215细胞培养中对HBsAg、HBeAg表达的作用
• 2.2.3 药物对2215细胞DNA的抑制试验结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 鸡内金酶解产物氨基酸分析及体外抗HBV活性研究
• 1 鸡内金酶解试验研究
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.3.1 正交设计酶解试验结果
• 1.3.2 酶解产物氨基酸含量分析结果
• 2 酶解产物体外抗HBV活性研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 药物对2215细胞的毒性
• 2.2.2 药物在2215细胞培养中对HBsAg、HBeAg表达的作用
• 3 讨论
• 参考文献
• 第四章 紫红獐牙菜及近缘种有效成分HPLC法含量分析研究
• 1 材料
• 2 方法和结果
• 2.1 色谱条件
• 2.2 供试品和对照品溶液的制备
• 2.3 方法学考察
• 2.4 样品测定
• 2.4.1 紫红獐牙菜不同药用部位含量测定
• 2.4.2 紫红獐牙菜及其近缘种含量测定
• 3 讨论
• 参考文献
• 第五章 紫红獐牙菜药材HPLC法指纹图谱研究
• 1 材料
• 2 方法与结果
• 2.1 色谱条件
• 2.2 供试品和对照品溶液的制备
• 2.3 指纹图谱及技术要求、主要色谱峰的归属
• 2.3.1 指纹图谱的制备
• 2.3.2 共有指纹峰的标定
• 2.3.3 共有指纹峰面积的比值
• 2.3.4 非共有峰面积的比值
• 2.3.5 主要指纹峰的归属
• 2.4 方法学考察
• 3 讨论
• 参考文献
• 第六章 文献综述
• 1 复方紫金肝泰的研究概况
• 1.1 紫金胶囊的研究概况
• 1.2 鸡内金的研究概况
• 2 獐牙菜属植物研究概况
• 2.1 獐牙菜属药用植物资源及民族民间药用情况
• 2.2 獐牙菜属植物的化学成分研究
• 2.2.1 （?）酮及其苷类化合物
• 2.2.2 环烯醚萜及其苷类化合物
• 2.2.3 三萜及其苷类化合物
• 2.2.4 黄酮及其苷类化合
• 2.2.5 其他类化合物
• 2.3 獐牙菜属药用植物的现代药理作用
• 2.3.1 治疗肝炎作用
• 2.3.2 抗病毒作用
• 2.3.3 对胃肠道的作用
• 2.3.4 降血糖作用
• 2.3.5 对中枢神经系统的作用
• 2.3.6 抗菌作用
• 2.3.7 其他作用
• 2.4 獐牙菜属药用植物现代临床应用
• 3 从植物中寻找抗HBV药物的方法和技术
• 3.1 抗HBV药物筛选方法
• 3.2 植物中活性成分研究方法和技术
• 参考文献
• 结语与创新
• 致谢
• 博士研究生期间已发表和待发表的论文
• 附图