论文摘要
目的脑胶质细胞瘤约占成人原发性颅内肿瘤的50-60％，是最常见的颅内恶性肿瘤。胶质瘤的治疗，目前以手术治疗为主，由于肿瘤呈浸润性生长，与脑组织无明确分界，难以彻底切除，术后复发也几乎是不可避免的。因此，深入研究胶质瘤的生物学行为以及其生长调控因子，对于术后患者辅助治疗的选择以及预后的精确估计都有很深刻也很实际的意义。本试验从上述问题着手，了解凋亡抑制蛋白（IAP）Survivin在脑胶质瘤中表达情况，以此探讨Survivin的表达与肿瘤异质性之间的联系，从而进一步提高脑质瘤的总体治疗水平。实验方法方法：（1）研究对象：选择选取中国医科大学第一临床学院神经外科2003年1月至2004年12月间手术切除的人脑胶质瘤组织标本54例，根据WHO（1999年）关于人脑胶质瘤病理分类方法，采用S—P超敏（鼠、兔）试剂盒免疫组化方法染色，选取正常脑组织6例作为染色对照组。（2）石蜡切片及HE染色：手术切除标本常规，10％福尔马林溶液固定，石蜡包埋，制成4μm厚切片。（3）免疫组化染色：石蜡切片常规二甲苯脱蜡，每张切片加1滴过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育20分钟。切片放入0.01nmol/L的枸橼酸溶液中，微沸，室温下自然冷却。每张切片1滴非免疫动物血清，室温下孵育20分钟，甩去。加适当稀释的Survivin第一抗体，4℃过夜。第二天每张切片加1滴生物素标记的第二抗体，室温下孵育10分钟。加1滴链亲和素-过氧化酶溶液，室温下孵育10分钟。每张切片加2滴新鲜配置的CAB溶液。显微镜下观察5-10分钟，苏木素复染，中性树脂封固切片。Survivin染色的半定量判断标准，采用人工观察的方法。采用自动图像分析系统测定视野的光密度值。实验数据采用SPSS10.0 forwindows软件进行统计学处理。实验结果染色的结果显示所有的胶质瘤均显示了不同程度的Survivin的表达，但在正常脑组织中Survivin的表达均为阴性。Survivin的表达程度在不同级别胶质瘤中显示了明显差别，Survivin的表达程度随肿瘤级别升高而升高，统计学显示其分布差异显著（p<0.01）。同时，不同级别胶质瘤Survivin蛋白表达的光密度值有明显差别，组织级别越高，Survivin蛋白平均光密度值越大，随组织学级别升高Survivin蛋白平均光密度值有明显增加。恶性胶质瘤往往具有异质性，比较了肿瘤实质和其周边Survivin染色蛋白染色的光密度值，二者差异显著（P<0.001）结论1、Survivin在正常脑组织中均为阴性表达，在不同级别的脑胶质瘤组织中表达强度有明显差异，随脑胶质瘤的恶性程度增大而增高，提示Survivin表达的定量评估可作为胶质瘤术后恶性度和病人预后的判定指标之一。2、Survivin在同一胶质瘤实质区的表达水平明显高于周围浸润区，可反应同一种肿瘤的异质性和浸润范围，对于手术范围的确定是有意义的。