论文摘要
目的通过分析急性缺血性脑卒中患者外周血血小板活化水平以及正常血小板在体外受ADP诱导剂活化后对培养的人脐静脉内皮细胞株表达趋化因子IL-8、MCP-1和MIP-1α的影响，探索活化血小板参与急性缺血性脑卒中炎症反应的病理机制。方法1检测60例急性缺血性脑卒中患者外周血血小板活化程度，采用Advia120全自动血细胞分析仪以平均血小板内含物浓度（MPC）这一新指标评价血小板活化水平，并与对照组进行比较。2取30例健康人外周血，根据Ahnadi CE等的方法制备血小板悬液，分别以低中高浓度（0.8umol／1、4.0 umol／l、20.0 umol／l）的ADP作诱导剂诱导其活化，用Bayer Advial20全自动血细胞分析仪检测MPC随时间变化的关系，建立量效关系，模拟出近似急性缺血性脑卒中患者外周血血小板的活化程度。3复苏冰冻的ECV304人脐静脉内皮细胞（HUVECs）株，传代培养。当细胞生长良好时，吸去培养液进行血小板刺激实验。采集健康人外周血制备成混合血小板悬液，分以下四个实验组：（1）活化血小板组：终浓度为0.8 umol／l的ADP与血小板室温下作用20 min后再与HUVECs共同孵育。（2）静息血小板组：血小板悬液室温下静置20 min后与HUVECs共同孵育。（3）ADP对照组（4）空白细胞对照组。各组细胞在5％CO2 37℃条件下孵育12小时，用TRNzol提取总RNA，再以RT-PCR技术检测内皮细胞趋化因子IL-8、MCP-1和MIP-1αmRNA的表达。结果1急性缺血性脑卒中患者外周血血小板MPC水平为21.46±3.44g／dl，与健康对照组比较t=32.24，P＜0.01，差别有显著性。2 ADP诱导血小板MPC减低存在一定的剂量依赖关系，用低剂量（0.8umol／l）ADP诱导血小板20min就可得到一般活化的血小板，模拟急性缺血性脑卒中患者体内循环血小板的活化状态。3活化的血小板与HUVECs共同培养后，可刺激内皮细胞表达趋化因子IL-8、MCP-1和MIP-1αmRNA，而静息的血小板以及相同含量的ADP均不能刺激内皮细胞IL-8、MCP-1和MIP-1αmRNA的表达。结论急性缺血性脑卒中患者外周血血小板处于活化状态，体外模拟这一活化状态的血小板可通过某种途径刺激培养的血管内皮细胞表达趋化因子IL-8、MCP-1和MIP-1α，进而参与炎症反应。这种血小板-内皮反应有可能是活化血小板参与急性缺血性脑卒中炎症反应的病理机制。
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标签：急性缺血性脑卒中论文; 血小板活化论文; 炎症反应论文; 内皮细胞论文; 趋化因子论文;