肝细胞生长因子(HGF)对系统性硬皮病皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原的影响及其机制的研究

肝细胞生长因子(HGF)对系统性硬皮病皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原的影响及其机制的研究

论文摘要

目的:研究肝细胞生长因子对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原表达的影响并探讨其可能的机制,为临床寻找有效的治疗系统性硬皮病的方法提供依据。方法:1.系统性硬皮病患者及正常人皮肤活检标本各5例进行成纤维细胞原代培养,用角蛋白和波形蛋白染色进行成纤维细胞的鉴定。2.MTT法检测HGF对皮肤成纤维细胞增殖活性的影响。3.RT-PCR方法检测SSc患者及正常人皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原、COX-1、COX-2的mRNA表达水平。4.RT-PCR方法检测不同时间点HGF对SSc患者皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原、COX-2的mRNA表达水平的影响。5.选择性COX-2抑制剂NS398与HGF联合干预后,RT-PCR方法检测不同时间点SSc皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化。结果:1.培养细胞具有成纤维细胞的形态,角蛋白染色阴性,波形蛋白染色阳性。2.20ng/ml HGF在48小时内对皮肤成纤维细胞的增殖活性无明显影响。3.SSc患者皮肤成纤维细胞与正常人皮肤成纤维细胞相比,COX-2的mRNA表达下降,Ⅰ型胶原的mRNA表达增加,而COX-1的mRNA表达无明显差异。4.HGF可诱导SSc皮肤成纤维细胞中COX-2 mRNA的表达(P<0.05),其表达量与HGF的作用呈时间依赖性递增。HGF可抑制SSc皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),其表达量与HGF的作用呈时间依赖性递减。5.选择性COX-2抑制剂NS398可显著减弱HGF对SSc皮肤成纤维细胞中Ⅰ型胶原表达的抑制作用(P<0.05)。结论:HGF可诱导SSc患者皮肤成纤维细胞中COX-2的表达,并抑制Ⅰ型胶原的合成。选择性COX-2抑制剂NS398可显著减弱HGF对SSc患者皮肤成纤维细胞胶原合成的抑制作用,提示HGF具有抗纤维化作用,其机制可能依赖于COX-2的表达。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略词表
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料和方法
  • 2.1 主要实验仪器及试剂
  • 2.2 实验步骤
  • 2.3 统计学分析
  • 第三章 结果
  • 3.1 皮肤成纤维细胞的鉴定
  • 3.2 MTT试验检测HGF对人皮肤成纤维细胞增殖的影响
  • 3.3 对照组皮肤成纤维细胞中COL1A1、COX-1及COX-2的表达
  • 3.4 HGF对SSc皮肤成纤维细胞中COX-2 mRNA表达的影响
  • 3.5 HGF对SSc皮肤成纤维细胞中I型胶原表达的影响
  • 3.6 用选择性COX-2抑制剂NS398预处理后再加HGF对SSc皮肤成纤维细胞I型胶原表达的影响
  • 第四章 讨论
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 致谢
  • 在读期间发表的文章
  • 相关论文文献

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