循环抗原和血清抗体的联合检测及蛋白质组分析用于日本血吸虫病诊断的初步研究

论文摘要

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3（Sj14-3-3）在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法利用血吸虫成虫培养物进行Sj14-3-3和血吸虫循环抗原成分关联的验证,制备并纯化重组sj14-3-3（rSj14-3-3）的单克隆抗体和单特异性多克隆抗体,并以此建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（sandwich-ELISA）;以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,比较用于急、慢性血吸虫病诊断的特异性和敏感性。结果免疫印迹（Western blotting）显示,Sj14-3-3是血吸虫循环抗原的主要组分之一。sandwich-ELISA,间接ELISA和联合检测三种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%,75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性为分别为46.4%,61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性为分别为96%,92%和92%:吡喹酮杀虫治疗后的患者血清161份,其中急性感染治疗后1年以内转阴率分别为50%,38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%,55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%,83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫的交叉反应性分别为0%,15.6%和15.6%;对于钩虫的交叉反应为8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清、钩虫感染者血清交叉反应、慢性治疗后1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率具有显著性差异（P＜0.05）;而特异性及其他化疗后患者血清的转阴性差异无显著性（P＞0.05）。结论循环14-3-3抗原和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值,且可用于临床治疗的疗效考核。目的应用双向电泳结合免疫印迹（immunoblotting）技术分析血吸虫成虫粗抗原。方法尾蚴感染家兔42天后,收集成虫并制备血吸虫成虫粗抗原,将血吸虫成虫粗抗原纯化进行2-DE电泳分离,同时用血吸虫患者混合血清作为一抗。将2-DE电泳凝胶转NC膜后,用患者血清和对照正常人血清分别进行免疫印迹,得到相应的2-DE免疫印迹图谱,用双向电泳图像分析软件进行分析比对,挑点进行液相色谱结合质谱（LD-LC-MS）分析。结果采用P13-10胶条考马斯亮蓝染色后,血吸虫成虫粗抗原2-DE图谱显示了198个蛋白斑点。2-DE免疫印迹结果显示:实验组图谱呈现抗原抗体反应点,而对照组为0个。采用软件分析后,选出18个明显可见点进行MS,初步分析有2个点和血吸虫蛋白质库匹配较好。结论血吸虫成虫粗抗原双向电泳分离后有198个蛋白斑点。其免疫印迹分析可找到个特异性的抗原点,这为寻找血吸虫病免疫诊断的蛋白标志物提供基础。

论文目录

• 论文第一部分 日本血吸虫循环抗原和血清抗体的联合检测
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 论文第二部分 2-DE和免疫印迹技术分析血吸虫成虫诊断抗原谱的初步研究
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一（个人简历）
• 附录二（致谢）
• 附录三（综述）