论文摘要
牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫（Theileria sergenti）寄生于牛红细胞和淋巴细胞引起的一种血液原虫病。近些年,瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势,给相关国家的畜牧业带来了较大的经济损失,引起了国内外兽医界的广泛关注。据报道T.sergenti梨浆虫表面蛋白p23表达于瑟氏泰勒虫裂殖子膜表面,是主要免疫原性蛋白之一。本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫日本株p23表面蛋白基因（D84447）设计了一对特异性引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取了牛瑟氏泰勒虫基因组DNA,克隆了大小为507 bp的p23表面蛋白基因的部分片段,对所克隆的p23基因序列与基因库中D84447序列进行比较分析,结果同源性达99.4%,证明该基因片段确为牛瑟氏泰勒虫p23表面蛋白基因。p23表面蛋白基因与pGEX-4T-1载体进行连接、酶切鉴定、PCR鉴定和测序,成功地构建了含有目的基因片段的原核表达载体pGEX-4T-p23。然后将原核表达载体pGEX-4T-p23转化到E.coli BL21中,用IPTG进行诱导表达,表达出约46 ku的p23融合蛋白。同时根据SDS-PAGE对融合蛋白的表达条件进行了优化,确定最佳诱导时机是转接种后2.0 h,最佳诱导温度是34℃,最佳诱导时间为6.0 h,最适IPTG浓度为0.08 mmol/L。在优化条件下融合蛋白的表达量经Bandscan5.0软件分析占菌体总蛋白的31.7%,Western blotting检测,该融合蛋白可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性。