论文摘要
中华鳖（Pelodiscus sinensis）是我国珍贵的经济水产动物之一，我国的中华鳖产量一直位居世界产量的首位。但近年来，由于大规模养殖，随着高密度化养殖的迅速发展和养殖范围的日益扩大，危害养殖中华鳖的各种病原也不断出现，养殖的中华鳖常常会爆发大规模疾病和死亡。中华鳖常发生的疾病有腐皮病、红底板病、白底板病、红脖子病、疥疮病、腮腺炎病、穿孔病、出血病等，病原包括真菌、细菌、病毒、寄生虫及其他非生物因素和不明病因的原因等，这些疾病多传染性强、感染范围广、传播范围大、死亡率高，给中华鳖养殖业造成了严重的经济损失，严重制约了中华鳖养殖产业的健康可持续发展。胡大雁等人[1]从发病的中华鳖肝脏、脾脏、肾脏中分离出一株毒力强、危害大的嗜水气单胞菌T0608菌株，并认为该菌株是这次中华鳖疾病爆发的继发病原。本论文的研究将嗜水气单胞菌T0608菌株分1.5×1010、1.5×109、1.5×108cuf/ml三个梯度感染健康中华鳖，并取濒死的中华鳖进行细菌分离，证明该菌株能有效地感染健康中华鳖和导致其发病，并得出了该菌株对中华鳖的亚致死浓度为1.5×108cuf/ml。为建立嗜水气单胞菌T0608菌株亚致死剂量感染中华鳖的实验条件，在本论文的研究中对中华鳖的饲养水体条件进行了监测，绘制了氨氮标准曲线和亚硝态氨曲线，对水体采用恒定控温、定时换水、氯化铵调节氨氮含量，使中华鳖饲养环境保持在稳定范围，把环境因子改变产生的影响降至最低；还进行了不同的采血方式对中华鳖血清酶指标的测定影响的研究，结果证明常用抗凝剂肝素和EDTA的使用不影响中华鳖血清酶指标的测定。本论文的研究采用了三种染色方法，即Diff-Quik染色法、Giemsa法、Wright-Giemsa法对中华鳖血细胞进行染色，用DP-71显微成像系统采集血细胞显微图像，经Image-pro Express5.1测量和分析中华鳖各类血细胞大小、比例。结果表明Diff-Quik染色下中华鳖各类血细胞核质染色差别最明显，核质界面明显，各类白细胞的颗粒明显、易分辨，并测得中华鳖红细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞大小分别为17.86μm×12.43μm、16.26μm×13.67μm、12.28μm×10.98μm、14.63μm×12.83μm；嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞占白细胞百分比分别为54.7%、13.72%、6.22%和24.72%；嗜碱性粒细胞仅为0.65%。比较Diff-Quik法、Giemsa法、Wright-Giemsa法三种染色法后得出虽然三种染色方法在细胞大小及白细胞分类比例上无明显差异，但从核质界面、细胞颗粒特征性染色等来看，Diff-Quik法和Giemsa法优于Wright-Giemsa法，Diff-Quik法染色快捷、核质和颗粒染色清晰度更高，是一种适合大量标本快速染色的染色法，最适用于中华鳖的血细胞染色。研究还对健康中华鳖和T0608菌株亚致死感染量的中华鳖血细胞进行了AKP染色，结果显示健康的中华鳖成熟嗜中性粒细胞内有碱性磷酸酶阳性颗粒，感染T0608菌株的中华鳖嗜中性粒细胞碱性磷酸酶阳性颗粒和阳性率细胞有所减少；健康中华鳖和T0608菌株亚致死感染量的中华鳖血细胞的MPO染色显嗜中性粒细胞均呈红色，部分细胞内有阳性颗粒。健康中华鳖和T0608菌株感染后中华鳖血细胞均有PAS阳性颗粒，无明显差别。亚致死感剂量嗜水气单胞菌T0608菌株感染后24h－48h内中华鳖的白细胞数目增多，其中以嗜中性粒细胞和单核细胞的增多最为明显，血清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶均有所上升。96h攻毒后中华鳖血清中各种酶指标和白细胞数目都有所下降，但依然高于对照组中华鳖的对应指数。攻毒组的GOT活力在96小时最高、GPT活力在48小时最高，达到72.74卡门式单位，与对照组有显著性差异。AKP、ACP、SOD和LZM的活力都是48小时达到最高，都与对照组有显著性差异。本研究中还用嗜水气单胞菌T0608菌株的灭活菌悬液以7.5×108cuf/ml的浓度注射中华鳖，24h、48h和96h后分别测量免疫中华鳖血清中AKP，ACP，GOT，GPT，SOD，LZM等指标的变化，结果表明免疫组AKP活力均高于对照组，作用效果较为显著；免疫组的各种酶指标都有上升，GOT的活力在96小时最高，比对照组提高了59.37%，GPT的活力在24小时最高，达到了44.87卡门式单位，LZM在96小时可达到2.74U，比对照组有所升高，但和对照组差异并不显著。
论文目录
相关论文文献
标签：中华鳖论文; 嗜水气单胞菌菌株论文; 血细胞分类论文; 染色论文; 血清酶指标论文;