论文摘要
【目的】1.观察重组人IFN-γ对体外人多形性胶质母细胞瘤（GBM）U251 细胞胞膜MHC-I 类分子表达的影响;2.观察β-榄香烯和/或热对体外GBM U251细胞胞膜热休克蛋白70（HSP 70）分子的表达的影响;3.观察重组人IFN-γ和/或热对体外GBM U251 细胞胞膜MHC-I 类分子和HSP70 分子表达的影响;4.初探高免疫原性GBM U251 细胞疫苗的制备方法及其体外诱导的抗瘤作用机制。【方法】流式细胞仪（FCM）检测不同干预因素处理后的U251 细胞胞膜MHC-I类分子和HSP70 分子表达变化情况;以诱导MHC-I 类分子高表达、HSP70 分子高表达、以及MHC-I 类分子和HSP70 分子双高表达的最佳方案分别处理U251细胞,最后经MMC 灭活制成3 种不同的细胞疫苗。体外刺激健康捐献者PBMCs作为效应细胞,进行肿瘤特异性杀伤试验;MTT 比色法检测其杀伤活性;同时以抗人HLA-A,B,C 和抗人HSP70 单克隆抗体行特异性杀伤试验的阻断试验和交叉阻断试验。FCM 检测疫苗刺激前后PBMCs CD4+、CD8+T 淋巴细胞比例变化;ELISA 法检测效应细胞攻击靶细胞后的IFN-γ、IL-2 的分泌情况;电镜观察靶细胞受CTLs 攻击后的靶细胞的超微结构的变化。【结果】1.500U/ml IFN-γ诱导48 小时U251 细胞胞膜的MHC-I 类分子表达率最高,达89.9%;2. β-榄香烯0.1mg/ml 诱导2 小时或热43℃休克2 小时的U251细胞胞膜HSP70 诱导表达率最高,分别为41.63 %和42.18%。3.双因素先500U/ml IFN-γ诱导48 小时+后热43℃休克2 小时诱导下U251 细胞胞膜MHC-I及HSP70 的双表达率最高,分别为96.00%和53.61%;4. MHC-I 类分子和HSP70分子双高表达的U251 细胞疫苗体外刺激的CTLs 的对野生型U251 细胞特异性
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