FTY720对胰腺癌细胞增殖和凋亡的作用研究

论文摘要

背景：胰腺癌在中国，日本，西欧各国均为发病率高的恶性肿瘤，预后极差，5年生存率仅为0.4％-4％，其治疗的首选方案为手术，但即使行手术治疗后。远期生存效果仍然较差，而胰腺癌往往因发现较晚，无法进行手术根治者可达90％，对于那些能手术切除的胰腺癌病人，由于肿瘤的早期复发，预后仍然很差。因而对胰腺癌从其他手段进行治疗是非常重要的。长期的临床实践表明，对于胰腺癌的治疗，单纯手术的治疗效果是有限的，同时由于肿瘤耐药性的产生，目前常用于胰腺癌的一些化疗药物的治疗效果也不佳。因此，为了提高胰腺癌患者的总的生存率，现在急切需要研究新的有效的治疗方法，比如新的化疗药，介入治疗和基因治疗。而进一步提高胰腺癌治疗效果的关键则在于加强基础研究，对其发病机理和分子生物学特性的进一步阐明可以进一步推动新型的分子水平的靶向治疗药物的发展和新的治疗方案的产生。FTY720是日本学者于上世纪90年代从冬虫夏草中得到的纯合提取物，在免疫移植研究中因其独特的免疫抑制作用被广泛应用于肝、肾等器官移植。它可引起淋巴细胞的凋亡而诱导机体的免疫。另外，在近年来的研究中，许多国内外学者报道了FTY720对于多种肿瘤细胞生长及侵袭性的抑制作用。进一步的研究发现，FTY720诱导肿瘤细胞凋亡的作用和其引起磷酸化Akt蛋白及Bcl-2蛋白的表达改变有关，但是，这中间的具体作用机制仍然没有没有完全阐明，这个问题引起了广泛的兴趣，同时也是本实验的研究目的。目的：FTY720是日本学者于上世纪90年代从冬虫夏草中得到的纯合提取物，在免疫移植研究中因其独特的免疫抑制作用被广泛应用于肝、肾等器官移植。当前的研究显示它也可能是一种有效的肿瘤抑制剂。因此，本实验的目的就是研究FTY720对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用，并探讨其机制。方法：不同浓度水平（0～17μM）的FTY720作用于人类胰腺癌细胞系BxPC-3，AsPC-1，PANC-1，选用不同实验方法观察形态学和分子生物学特性的改变。四唑盐比色实验（MTT方法）观察不同浓度FTY720对胰腺癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测药物诱导胰腺癌细胞的凋亡；划痕实验观察FTY720对细胞迁移能力的影响；3D细胞增殖实验观察FTY720对胰腺癌细胞增殖的影响；侵袭实验观察FTY720对细胞侵袭能力的影响；蛋白免疫印迹法（Western Blotting）检测不同药物处理后一些凋亡相关蛋白表达水平的变化，包括Bcl-2，p-Akt，Akt caspase-9和pro-caspase-3。统计学处理用SPSS13.0软件完成，计量资料数据表示方式以平均值±标准差（Mean±SD），两组计量资料采用非独立样本t检验，各组指标间的相关性采用Spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学显著性意义。结果：MTT结果显示不同浓度FTY720处理后，胰腺癌细胞的增殖受到不同程度的抑制，且这种抑制作用呈剂量依赖性，即随着浓度的增大，吸光度值明显减少，增殖抑制率明显增高，对于BxPC-3来说，24小时的半数死亡率约为7.6μM，AsPC-1与PANC-1则相似，药物处理24小时后它们的半数死亡率为10.1μM及10.7μM。流式细胞术提示FTY720可以明显促进三株胰腺癌细胞的凋亡，且具有剂量依赖性。划痕实验显示FTY720明显影响三株胰腺癌细胞的迁移能力。3D细胞增殖实验显示FTY720可抑制三株胰腺癌细胞增殖性。Transwell小室侵袭实验显示FTY720能明显抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。Western Blotting结果显示FTY720对于细胞内Bad的表达没有明显影响，但可以明显下调p-Akt的表达量，降低Bcl-2的表达水平，激活caspase-9，下调pro-caspase-3的表达。结论：本实验以三株人类胰腺癌细胞系为对象，研究FTY720对胰腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。研究结果表明FTY720可以明显抑制此三株胰腺癌细胞的增殖并促进其凋亡，同时也影响肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。作用效果相似。这过程与其影响Bcl-2及p-Akt蛋白的表达有关，进而激发了caspase家族介导的凋亡。这为FTY720在临床化疗上的应用提供了理论依据。所有这些结果表明，FTY720可以作为胰腺癌治疗的一种新型化疗药物。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、正文
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 四、综述 胰腺癌的基因治疗新进展
• 参考文献
• 五、致谢