调节性树突状细胞对哮喘小鼠气道炎症及IL-12、IgE分泌的影响

论文摘要

树突状细胞（dendritic cells，DC）是已知的体内功能最强的抗原递呈细胞（antigen presenting cells，APC），它可以活化T细胞，启动免疫应答，还可以调节免疫应答的反应强度，诱导免疫耐受。我们前期的实验证实，在肺脏基质细胞的微环境中，成熟树突状细胞（mature dendritic cells，mDC）可被诱导为一种免疫表型为CD11clowIalowCD11bhigh的调节性树突状细胞（DCreg，rDC）。这种rDC缺乏活化T细胞的重要信号（Ia、IL-12p70），但高分泌可以抑制未成熟DC发育成熟的Th2型细胞因子IL-10。而且我们发现，通过MTT检测，相对于mDC组，这种DCreg诱导同种异体T细胞的增殖能力明显降低。结合以上DCreg的表型、细胞因子分泌及功能特点，我们推测这种DCreg可以诱导免疫耐受。支气管哮喘是一种常见的呼吸系统慢性炎性疾病，它由多种细胞组分（包括嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞和肥大细胞等）及其炎症相关因子参与。其发病机制与效应性T（CD4＋T）细胞活化，并分泌多种细胞因子，导致Th1型和Th2型细胞因子失衡有关。本实验证实了这种DCreg对哮喘小鼠气道炎症的缓解作用及对IL-12、IgE分泌的影响。我们的研究证明，经诱导产生的DCreg对哮喘小鼠气道炎症有治疗的作用，DCreg应用于哮喘治疗具有良好的前景。研究目的观察体外培养的DCreg能否在体内发挥缓解哮喘小鼠炎症的作用及对IL-12、IgE分泌的影响，并探讨其缓解炎症的可能机制。实验方法第一部分，调节性树突状细胞（DCreg）的获得。用体外培养的小鼠肺脏基质细胞（MPSC）的上清液来模拟体内的肺脏基质微环境。用小鼠重组细胞因子白介素-4（rmIL-4）、重组巨噬细胞粒细胞集落刺激因子（rmGM-CSF），诱导骨髓造血干细胞（HSC）向DC分化，并用脂多糖（LPS）诱导其成熟，模拟体内的mDC群。将mDC与MPSC上清液共培养一周后，得到一种新型的DC亚群，流式细胞仪检测发现这是一群表型稳定在CDllclowCDIalowCDllbhigh的调节性DC。第二部分，调节性树突状细胞对哮喘小鼠气道炎症及IL-12、IgE分泌的影响。除正常组小鼠外，其余各组均诱导哮喘样症状。经卵白蛋白（OVA）的初次致敏、加强致敏及雾化攻击后，如果小鼠出现呼吸深快，活动减少，头面部瘙痒，背部弓起、抬高，二便失禁为阳性反应，表明哮喘模型建立成功。动物分组及rDC的免疫如下：将40只C57小鼠随机分成四组，每组10只。第一组：正常组，分别在Day0、Day7、Day14，按100μl/只的量腹腔注射磷酸盐缓冲液（PBS）。第二组：mDC组，分别在Day0、Day7、Day14，按5×106/鼠的细胞量腹腔注射mDC。第三组：rDC组，分别在Day0、Day7、Day14，按5×106/鼠的细胞量腹腔注射rDC。第四组：OVA组，未做处理的哮喘组。末次激发的24h后，经小鼠眼球采血。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清的IL-12及IgE水平。常规留取小鼠右肺中叶，经苏木素-伊红（HE）染色后行病理学观察。利用ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-12的分泌水平。并对BALF行白细胞计数并将细胞分为巨噬细胞，淋巴细胞，中性粒和嗜酸性粒细胞。结果通过研究发现，体内回输调节性DC能有效地抑制小鼠肺泡灌洗液和肺实质中的中性细胞及嗜酸性粒细胞的浸润，BALF和血清中IL-12的分泌均增多，血清IgE分泌下降。而回输成熟DC的小鼠上述指标与OVA组小鼠无明显差异。结论体外培养的肺脏基质细胞的上清液可诱导成熟DC分化成为一群具有免疫抑制功能的调节性DC。其不但在体外可以抑制T细胞的增殖，过继回输哮喘小鼠体内，上调肺泡灌洗液和血清中IL-12的表达，下调血清IgE的表达，纠正哮喘小鼠细胞因子的失衡，缓解T细胞介导的气道过敏性炎症反应。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 第一部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文