法尼醇X受体对L02细胞脂代谢的影响及机制

论文摘要

研究背景脂肪肝已经成为发达国家和富裕地区慢性肝病的首要病因,在我国是仅次于乙肝病毒的第二位慢性肝病的原因,严重影响国民的健康水平及生活质量,因此,有关脂肪肝的研究始终是一个热点问题。法尼醇X受体（farnesoid X receptor,FXR）、小异二聚体伴侣分子（small heterodimer partner,SHP）、固醇调节元件结合蛋白1c（sterol regulatory element-binding protein-1c, SREBP-1c）属于核受体或核转录因子,其中初级胆酸是FXR的天然激动剂。FXR广泛参与胆汁酸、糖及脂代谢,有可能成为治疗脂肪肝和代谢性疾病的新的靶点;SHP在胆汁酸、糖、脂代谢中也具有重要作用,是脂肪肝发病中的关键调节因子; SREBP-1c参与脂肪生成基因表达的调控;其中SHP是FXR的靶基因,SREBP-1c是SHP的靶基因。本实验采用油酸钠诱导人正常肝细胞珠L02细胞建立脂肪变肝细胞模型、采用FXR激动剂鹅去氧胆酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）钠盐建立干预模型,动态观察肝细胞脂变过程中FXR、SHP及SREBP-1c表达的变化,从肝细胞水平探讨非酒精性脂肪肝脂质沉积的可能机制,为寻找新的治疗靶点提供实验依据。方法1、人肝细胞株L02用含10%胎牛血清的1640培养基常规培养、传代。2、MTT比色法筛选油酸钠最佳作用浓度和作用时间。3、实验设立对照组（记为C组）、模型组（加油酸钠,记为F组）和干预组（模型中加入鹅去氧胆酸钠【1】,记为F1组）。4、细胞内TG含量检测及油红O染色鉴定L02肝细胞脂肪变变化;细胞培养上清ALT、AST含量鉴定细胞损伤变化;RT-PCR、Western Blot检测FXR、SHP、SREBP-1c受体mRNA及蛋白表达变化。结果1、L02肝细胞的脂肪变模型建立成功。随着造模时间延长,肝细胞脂肪变程度加重。1)油红O染色:对照组仅见少量橘红色脂滴;脂变和干预组肝细胞内各时间段都可见明显脂滴,并有不同程度的融合,随着培养时间延长加重;但是,干预组的肝细胞内脂滴较脂变组有所减少（P<0.01）。2)脂变组TG含量在24、48、72h各时间段均比对照组明显增加（P<0.01）;与脂变组相比,干预组TG含量在24、48、72h时相应时间段均明显降低（P<0.01）。2、各组细胞培养上清ALT、AST变化仅脂变组72小时AST、ALT水平略有升高,各组均无明显差异（P>0.05）。3、各组细胞内FXR、SHP、SREBP-1 c mRNA及蛋白表达的变化与对照组比较,脂变组各时间段的FXRmRNA及蛋白表达均有所下调,但这种差别无统计学意义（P>0.05）;而SHP、SREBP-1c mRNA及蛋白表达明显上调,并随培养时间延长更明显（P<0.01）。在干预组,FXRmRNA及蛋白的表达较脂变组和对照组明显升高,各时间点比较都具有显著性差异（P<0.01）;SHPmRNA及蛋白表达同步升高（P<0.01）;SREBP-1c mRNA及蛋白虽然比对照组明显上调（P<0.01）,但是与脂变组相比显著降低（P<0.01）。结论1、FXR表达下调与肝细胞脂肪沉积密切相关;2、促进FXR表达可能通过上调SHP的水平、抑制其靶基因SREBP-1c表达而改善L02细胞脂肪变性;3、SHP在L02细胞脂肪变性中可能具有双向调节作用;4、FXR有可能成为治疗脂肪肝的新靶点,FXR激动剂鹅去氧胆酸钠具有明显改善肝细胞脂肪变性的作用。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：法尼醇X 受体对L02 细胞脂代谢的影响及机制
• 前言
• 第一部分 法尼醇X 受体对L02 细胞脂代谢的影响
• 前言
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 法尼醇X 受体对L02 细胞脂代谢调控的机制研究
• 前言
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述一
• 文献综述二
• 致谢
• 攻读硕士学位期间完成的论文