论文摘要
目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者外周血单个核细胞（PBMC）整体组蛋白修饰情况及PBMC肿瘤坏死因子-α（TNF-a）、环氧合酶-2（COX-2）基因启动子区域组蛋白乙酰化情况。方法：收集12例T2DM患者及12例健康对照PBMC,H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙酰化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙酰化水平。实时多聚酶链反应（Real time-PCR）法检测T2DM PBMC组蛋白修饰酶谱、TNF-a mRNA、COX-2 mRNA表达水平。染色质免疫沉淀技术检测TNF-a及COX-2基因启动子区域组蛋白H3乙酰化状态。结果：与健康对照组比较,T2DM患者PBMC组蛋白H3K4甲基化水平升高（P<0.05）、H3乙酰化水平升高（P<0.01）、H4乙酰化水平升高（P<0.05）。Real time-PCR结果显示T2DM患者PBMC组蛋白去乙酰化酶HDAC2、SIRT1 mRNA表达分别是健康对照组的3.55±0.30（P<0.01）、0.40±0.25倍（P<0.05）；组蛋白乙酰转移酶P300、CREBBP mRNA表达分别是健康对照组的3.11±0.38（P<0.05）、2.78±0.45（P<0.05）倍；组蛋白去甲基化酶KDM3A、KDM5B和LSD1 mRNA表达分别是健康对照组的0.43±0.43（P<0.05）、3.55±0.30（P<0.01）和0.36±0.35（P<0.05）倍；组蛋白甲基转移酶SET1mRNA表达是健康对照组的3.06±0.51倍（P<0.05）。与正常对照组比较,T2DM患者PBMC TNF-a及COX-2 mRNA表达增高,TNF-a及COX-2基因启动子区域组蛋白H3呈高乙酰化状态。结论：2型糖尿病PBMC整体组蛋白修饰及组蛋白修饰酶谱异常,TNF-a及COX-2基因启动子区域组蛋白H3高乙酰化。目的：探讨成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）患者外周血CD4+T细胞整体组蛋白修饰及CD4+T细胞叉头框蛋白3 （Foxp3）基因启动子区域组蛋白乙酰化情况。方法：收集16例LADA患者及16例健康对照外周血单个核细胞,磁珠分选CD4+T细胞,H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙酰化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4/H3K9甲基化及H3/H4乙酰化水平。Real time-PCR法检测CD4+T组蛋白修饰酶谱及Foxp3 mRNA表达水平。染色质免疫沉淀技术检测Foxp3基因启动子区域组蛋白H3乙酰化状态。结果：与健康对照组比较,LADA患者CD4+T细胞组蛋白H3/H4乙酰化水平降低（P<0.05）。Real Time-PCR结果显示LADA患者组CD4+T细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC2、HDAC5、SIRT1 mRNA表达上调；组蛋白乙酰转移酶P300、CREBBP、PCAF mRNA表达下调；组蛋白去甲基化酶LSD1 mRNA表达是健康对照组的0.17±0.13（P<0.01）倍；组蛋白甲基转移酶SUV39H2 mRNA表达是健康对照组的0.36±0.11（P<0.05）倍。LADA患者外周血CD4+T细胞Foxp3 mRNA表达较正常对照组降低（P<0.05）,Foxp3基因启动子区域（-501/-416）（-204/-114）组蛋白H3乙酰化水平降低（P<0.01）。结论：LADA患者CD4+T细胞整体组蛋白修饰及组蛋白修饰酶谱异常,Foxp3基因启动子区域（-501/-416）（-204/-114）组蛋白H3低乙酰化。目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）干预对LADA患者CD4+T细胞乙酰化水平及Foxp3表达的影响。方法采用密度梯度离心法分离LADA患者外周血单个核细胞,免疫磁珠分离CD4+T细胞,分别给予TSA处理培养相应时间后收集细胞。Western-blot法分析TSA干预对LADA患者CD4+T细胞H3乙酰化及Foxp3表达影响。结果与正常对照组相比,TSA干预组LADA患者CD4+T细胞组蛋白H3乙酰化水平及Foxp3表达水平均增加,并呈时间和剂量依赖性。结论TSA干预增加LADA患者CD4+T细胞H3乙酰化水平及Foxp3表达水平。
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