中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究

论文摘要

目的以中药壁虎为研究对象,首先进行急性毒性试验,了解其用药的安全性;观察含中药壁虎的血清体外对人食管癌EC9706、EC1细胞系生长抑制作用,中药壁虎体内对昆明种荷瘤小鼠(小鼠肉瘤S180)实体瘤的抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫系统的影响,探讨壁虎抗肿瘤作用机制;进一步研究了中药壁虎对环磷酰胺(CTX)治疗小鼠S180实体瘤的增效减毒作用。方法急性毒性试验应用中药急性毒性试验研究方法,测定小鼠灌胃给药的半数致死量LD50及最大给药量。体外抑瘤实验应用中药血清药理学实验方法,含中药壁虎血清体外作用于细胞,MTT法测定含不同浓度中药壁虎血清对食管癌EC9706和EC1细胞系生长的抑制作用并按台盼蓝排染法计数活细胞数,绘制细胞生长曲线。体内抑瘤实验建立移植性小鼠肉瘤S180实体瘤模型,荷瘤小鼠随机分为5组,分别为实验组(高、中、低剂量壁虎粉)、空白对照组和阳性对照组。然后用不同剂量壁虎粉制成的混悬液对实验组荷瘤小鼠灌胃,空白对照组荷瘤小鼠给予等量生理盐水灌胃,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(CTX),用药14d后通过计算抑瘤率观察不同剂量的壁虎粉对小鼠肉瘤S180实体瘤的生长抑制作用。壁虎对免疫系统影响方面,在测瘤重的同时测胸腺重、脾脏重,计算胸腺指数、脾脏指数,并做腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞实验,计算吞噬率和吞噬指数。抗肿瘤机制方面以小鼠肉瘤组织为研究对象,用SABC免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的蛋白表达,TUNEL方法检测细胞凋亡率。增效减毒方面,建立移植性小鼠肉瘤S180实体瘤模型,随机分为对照组、CTX组及壁虎粉高、中、低剂量与CTX联合用药组。观察药物对肿瘤的抑制作用及对动物体重、免疫器官重量、白细胞数的影响。结果急性毒性试验无法测出壁虎粉的LD50,最大给药量实验小鼠未发现体重减轻及其它异常反应,结果显示小鼠的最大耐受量超过人临床用量的108倍。含中药壁虎的血清体外可抑制食管癌细胞的生长。体内中药壁虎可抑制小鼠肉瘤S180生长,高、中、低剂量组抑瘤率分别为49.8%、52.8%、43.1%;对免疫器官的影响不能提高荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数,对腹腔巨噬细胞不能增加其吞噬率及吞噬指数。机制研究方面可降低肿瘤组织VEGF、bFGF蛋白的表达,显著提高凋亡指数。增效减毒方面,单用CTX组的抑瘤率达到35.6% ,同时小鼠增重减慢,胸腺、脾脏也受到显著抑制,白细胞数明显减少;高、中、低剂量壁虎粉与CTX合用3组的抑瘤率分别为63.9%( P<0.01)、60.2%( P<0.01)、53.3%,且各剂量组小鼠体重及免疫器官重量、白细胞数均未见明显改变。结论中药壁虎常规临床用量安全可靠;中药壁虎体内外均有抗肿瘤活性;其抗肿瘤的部分作用可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡及抑制肿瘤血管的生成而实现。中药壁虎对CTX治疗小鼠移植性肿瘤S180有减毒增效作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 综述
• 1.1 中药壁虎的临床应用
• 1.1.1 抗肿瘤方面
• 1.1.2 结核病方面
• 1.1.3 骨与关节疾病
• 1.1.4 乳腺疾病
• 1.1.5 外用
• 1.1.6 其它
• 1.2 中药壁虎抗肿瘤及其它作用的实验研究
• 1.2.1 抗肿瘤的实验研究
• 1.2.2 其它实验研究
• 第2章 引言
• 第3章 材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 实验细胞株
• 3.1.3 主要试剂
• 3.1.4 主要仪器
• 3.1.5 药物
• 3.1.6 主要试剂的配制
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 中药壁虎配制
• 3.2.2 急性毒性试验
• 3.2.3 体外抑瘤实验
• 3.2.4 体内抑瘤实验
• 3.2.5 中药壁虎对免疫功能的影响
• 3.2.6 VEGF、bFGF 蛋白表达的检测
• 3.2.7 细胞凋亡率检测
• 3.2.8 中药壁虎对环磷酰胺治疗小鼠5180 实体瘤的增效减毒作用
• 3.2.9 统计学方法
• 第4章 结果
• 4.1 急性毒性试验结果
• 4.2 体外抑瘤实验结果
• 4.2.1 中药壁虎含药血清对体外细胞增殖作用的影响
• 4.2.2 中药壁虎含药血清对体外细胞生长作用的影响
• 4.3 体内抑瘤实验结果
• 4.4 小鼠5180 肉瘤组织病理学变化
• 4.5 壁虎对荷瘤小鼠免疫功能影响
• 4.6 壁虎对小鼠5180 肉瘤组织VEGF、BFGF 蛋白表达的影响
• 4.7 壁虎对小鼠5180 肉瘤细胞凋亡率的影响
• 4.8 壁虎对环磷酰胺治疗小鼠5180 实体瘤的增效作用
• 4.9 壁虎对环磷酰胺治疗小鼠5180 实体瘤的减毒作用
• 第5章 讨论
• 5.1 急性毒性试验结果分析
• 5.2 体内外抑瘤实验结果分析
• 5.3 抗肿瘤机制的研究探讨
• 5.4 增效减毒作用结果分析
• 第6章 结论
• 参考文献
• 附录图片
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的研究成果