OPS-Ia的抗氧化及抗糖尿病作用研究

论文摘要

本文探讨了仙人掌多糖分离和纯化工艺，研究了仙人掌多糖组分OPS-Ia对大鼠红细胞脂质过氧化损伤的保护作用。同时研究了OPS-Ia对链佐霉素糖尿病小鼠的治疗作用，并对其抗糖尿病机制进行了初步分析。1．仙人掌多糖分离和纯化采用二次回归正交旋转组合设计模型，以多糖活性为目标，研究超声破碎时间、液料比、pH值对OPS得率及活性的影响。结果表明，对OPS得率影响最大的是超声破碎时间，其次是液料比和浸提液pH值。pH值是影响多糖活性的主要因素，在酸性或碱性条件下提取的OPS活性较低。回归方程模型在本实验范围内可预测OPS得率。根据回归方程得到OPS得率的最优条件为超声破碎时间46min，液料比38(mL·g-1)，pH值7.12。OPS分别通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex葡聚糖柱层析分离纯化得到三种多糖组分，命名为OPS-Ⅰa、OPS-Ⅰb、OPS-Ⅱ’，其均分子量分别为60 kDa、12 kDa、167 kDa。2．OPS-Ⅰa对大鼠红细胞脂质过氧化损伤的保护作用方法：采用H2O2和Fe2+／H2O2体系对大鼠红细胞脂质进行氧化损伤，通过溶血率、高铁血红蛋白水平、红细胞膜脂质过氧化物含量、红细胞膜蛋白巯基含量、红细胞膜SOD活性和GSH-Px活性的测定来研究OPS-Ⅰa的抗氧化作用。结果：OPS-Ⅰa能剂量依赖性够抑制H2O2诱导的红细胞溶血和高铁血红蛋白的产生；能剂量依赖性地提高Fe2+／H2O2诱导的红细胞膜中SOD活性、GSH-Px活性和降低脂过氧化物的含量；同时，能够抑制Fe2+／H2O2引起的膜蛋白巯基含量的降低。结论：OPS-Ⅰa对H2O2和Fe2+／H2O2引起的红细胞膜脂质过氧化损伤有保护作用。3．OPS-Ⅰa对链佐霉素糖尿病小鼠的抗糖尿病作用方法：昆明种小鼠腹腔注射链佐霉素120 mg·kg-1诱导糖尿病动物模型。连续灌胃OPS-Ⅰa(50，100，200 mg·kg-1)22d，每天记录小鼠的饮水量和进食量，在第一周与第三周记录小鼠体重。实验期间分别在1d、11d和22d测定空腹血糖，末次给药后测定小鼠葡萄糖耐量。处死小鼠后取血测定血脂、血清钙、尿素氮；取出肝脏测定SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量、肝糖原、肝葡萄糖-6-磷酸酶活性。结果：OPS-Ⅰa能显著降低链佐霉素糖尿病小鼠的血糖、摄食量、饮水量，改善葡萄糖耐量；能降低血浆中总胆固醇、甘油三酯、尿素氮含量，提高血清钙、高密度脂蛋白含量；提高肝脏SOD活性、GSH-Px活性，降低MDA含量；能够提高肝糖原含量和降低肝脏葡萄糖-6-磷酸酶活性。结论：OPS-Ⅰa有改善STZ糖尿病小鼠症状，一定程度上逆转糖尿病造成的代谢紊乱，减轻糖尿病并发症症状。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述及前言
• 1 国内外研究现状
• 1.1 糖尿病的发病机制及治疗现状
• 1.1.1 Ⅰ型糖尿病的发病机制
• 1.1.2 Ⅱ型糖尿病的发病机制
• 1.1.3 糖尿病的治疗现状
• 1.2 植物多糖的降血糖作用
• 1.2.1 降血糖的植物多糖
• 1.2.2 植物多糖降血糖机制
• 1.3 多糖结构与降血糖作用的关系
• 2 研究的目的意义
• 第二章 OPS提取分离和纯化
• 1.材料与方法
• 1.1 材料与试剂
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验仪器
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 OPS提取条件设计
• 1.2.2 OPS的提取和分离
• 1.2.3 OPS含量分析
• 1.2.4 OPS的纯化
• 1.2.5 OPS的纯度鉴定与分子量测定
• 1.2.6 数据统计分析
• 2.结果和分析
• 2.1 正交实验结果
• 2.2 正交结果分析
• 2.3 OPS的分离纯化结果
• 2.4 纯度鉴定及分子量测定结果
• 3.讨论
• 4.小结
• 第三章 OPS-Ia对大鼠红细胞脂质过氧化的保护作用
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品及试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 大鼠红细胞氧化溶血率和溶血抑制率的测定
• 1.4.2 对高铁血红蛋白产生的影响
• 1.4.3 红细胞膜的制备
• 1.4.4 实验分组
• 1.4.5 脂质过氧化的测定
• 1.4.6 超氧化物歧化酶活性测定
• 1.4.7 谷胱甘肽过氧化物酶活性测定
• 1.4.8 红细胞膜蛋白巯基含量测定
• 1.4.9 OPS-Ia对红细胞膜蛋白质高分子聚合物的影响
• 2 结果与分析
• 2.1 OPS-Ia对大鼠红细胞氧化溶血的影响
• 2.2 OPS-Ia对高铁血红蛋白产生的影响
• 2.3 OPS-Ia对红细胞膜脂质过氧化、SOD及GSH-Px活性的影响
• 2.4 OPS-Ia对红细胞膜蛋白巯基基含量的影响
• 2.5 OPS-Ia对红细胞膜蛋白质HMA的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 OPS-Ia对链佐霉素糖尿病小鼠的抗糖尿病作用
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验仪器
• 1.3 药品和试剂
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 OPS的急性口服毒理学实验
• 1.4.2 OPS降血糖有效组分的初步筛选
• 1.4.3 OPS-Ia对STZ小鼠的抗糖尿病作用
• 1.4.4 血糖含量与糖耐量测定
• 1.4.5 血脂含量测定
• 1.4.6 血清钙、尿素氮含量测定
• 1.4.7 肝组织总SOD活性、GSH-Px活性及MDA含量测定
• 1.4.8 肝糖原含量测定
• 1.4.9 肝葡萄糖-6-磷酸酶活性测定
• 1.4.10 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 OPS口服急性毒性试验结果
• 2.2 OPS不同组分降血糖有效组分的初步筛选
• 2.3 OPS-Ia对糖尿病小鼠血糖、体重、水摄取量和摄食量的影响
• 2.4 OPS-Ia对糖尿病小鼠糖耐量的影响
• 2.5 OPS-Ia对糖尿病小鼠血脂的影响
• 2.6 OPS-Ia对糖尿病小鼠血清钙、尿素氮的影响
• 2.7 OPS-Ia对糖尿病小鼠肝组织氧化损伤的影响
• 2.8 OPS-Ia对STZ糖尿病小鼠肝糖原、肝组织G-6-Pase活性的影响
• 3 讨论
• 4 小结
• 下一步工作设想
• 参考文献
• 英文缩写词表
• 致谢
• 作者简介