论文题目: 内毒素耐受小鼠Toll样受体2、4及其下游分子Tollip蛋白表达变化的研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 急诊医学
作者: 马海鹰
导师: 殷国庆
关键词: 内毒素耐受,样受体,样受体,蛋白
文献来源: 东南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:建立内毒素耐受小鼠模型,确定建立模型合适的LPS剂量和LPS刺激持续时间,并观察TLR4表达与内毒素耐受的关系。方法:SPF级C57BL/6J小鼠随机分组。1)LPS剂量组:分为腹腔注射LPS 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/kg组,每日一次持续一周;对照组,腹腔注射同体积生理盐水;共6小组,每组3只。2)LPS刺激时间组:0.5mg/kg LPS连续每日腹腔注射一周、二周、三周,共3小组,每组3只动物。观察各组小鼠的一般情况。Western免疫印迹法测定小鼠脾脏TLR4表达变化。结果:各组小鼠在注射不同剂量的内毒素后,均出现不同程度的嗜睡、少动等感染征象,0.1mg/kg、0.5mg/kg组在第五天症状好转;剂量越大,小鼠对LPS反应越明显。0.5mg/kg组延长LPS刺激时间对小鼠日常行为无明显影响。脾脏TLR4蛋白定量结果:与对照组比较,各LPS剂量组脾脏TLR4表达均下调(P<0.05)。LPS剂量组间比较,0.1mg/kg组TLR4表达高于其它各组(P<0.05)。0.5mg/kg/天LPS刺激小鼠一周、二周、三周,脾脏TLR4表达量无差异。结论: 0.5mg/kg/天LPS、连续刺激二周,是较理想的内毒素耐受模型。内毒素耐受与脾脏TLR4下调有关。目的:研究内毒素对内毒素耐受小鼠Toll样受体2、4及其下游信号分子Tollip在不同器官表达的影响方法:SPF级C57BL/6J小鼠随机分成两大组:内毒素耐受组(ET组),每日腹腔注射LPS 0.5mg/kg,连续二周;正常对照组(NC组),每日腹腔注射同体积生理盐水,连续二周。第十五天,两组动物尾静脉注射LPS 10mg/kg,分别于0h(注射大剂量LPS前)、1h、6h、20h处死小鼠。共8小组,每组6只。Western免疫印迹法测定小鼠脾、肝、心组织TLR4、TLR2、Tollip表达。免疫组织化学法鉴定TLR4、TLR2、Tollip组织上定位。结果:(1)脾脏:与NC 0h组比较,ET 0h组TLR4显著下调(P<0.05);大剂量LPS攻击后,ET各组TLR4无明显变化, NC组TLR4在6h上调,20h达到高峰。与NC 0h组比较,ET 0h组TLR2显著下调(P<0.05);大剂量LPS攻击后,ET各组TLR2无明显变化, NC组TLR2在1h上调,20h达到高峰。与NC 0h组比较,ET 0h组Tollip显著下调(P<0.05);大剂量LPS攻击后,ET组、NC组Tollip在1h继续下调至几乎不表达,之后有上调趋势,但仍低于各自0h水平。免疫组化结果证实,TLR2、TLR4、Tollip阳性表达均分布于脾脏髓质区。(2)肝脏:与NC 0h组比较,ET 0h组TLR2下调不明显;大剂量LPS攻击后,ET各组TLR2无明显变化, NC组TLR2在1h迅速达到高峰,在20h有所下降但仍高于其0h水平。与NC 0h组比较,ET 0h组Tollip无显著下调;大剂量LPS攻击后,ET组、NC组Tollip在1h均明显上调,但ET组变化幅度略小。各组小鼠肝脏均不表达TLR4。免疫组化结果证实:Tollip阳性表达位于肝窦内。(3)心脏:与NC 0h组比较,ET 0h组TLR4显著下调(P<0.05);大剂量LPS攻击后,ET各组TLR4无明显变化,NC组TLR4在6h达到高峰。与NC 0h组比较,ET 0h组Tollip无显著下调;大剂量LPS攻击后,ET组、NC组Tollip在1h均明显上调,6h达到高峰,但ET组变化幅度略小,持续时间短。各组小鼠心脏均不表达TLR2。免疫组化结果证实:TLR4阳性表达位于心肌细胞膜上,Tollip阳性表达位于心肌细胞浆内。结论:内毒素耐受状态与各器官TLR2、4表达下调有关。再次受LPS攻击后,内毒素耐受动物TLR2、4表达量无变化,Tollip表达量仍有所增加,提示内毒素耐受降低机体对LPS反应性与TLR2、4不敏感有关。
论文目录:
中文摘要
Abstract
前言
综述
实验材料及仪器
实验一:内毒素耐受性小鼠模型的建立
实验二: Toll 样受体 2、4 及其下游信号分子 Tollip 在内毒素耐受小鼠器官中表达机制的研究
小结
参考文献
作者简介
致谢
发布时间: 2007-06-11
参考文献
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