论文摘要
研究背景:Nesprins（nuclear envelop speatrin repeat）是近年来发现的一个新的保守的蛋白家族。是细胞骨架的主要组成部分,具有维持细胞结构,协调细胞功能的作用。已发现的nesprins有nesprin-1（又称syne-1/ENAPTIN）、nesprin-2（又称syne-2/NUANCE）和nesprin-3三个蛋白亚型[1-3]。Neprins在多种组织中广泛表达,1其中nesprin-1、nesprin-2主要在骨骼肌、心肌的肌小节中呈高表达。有研究表明nesprin-1、nesprin-2在肌细胞结构和功能上有重要作用。在肌原细胞C2C12分化成肌管过程中nesprin-1、nesprin-2亚细胞定位从大部分位于细胞核/核被膜转移到细胞质/肌节,表明nesprin-1、nesprin-2可能在肌肉分化过程中有特殊作用[3-7]。Nesprin-1、nesprin-2突变将导致埃德二氏肌营养不良（EMDM, Emery-Dreifuss muscular dystrophy）,该病在心脏主要表现为传导障碍的心肌病[2,8]。但是nesprin-1、nesprin-2在心脏发育中的表达及作用尚未见报道,本实验观察nesprin-1、nesprin-2在小鼠心脏发育过程中的表达,以便进一步认识此蛋白家族在心脏发育过程中的作用。目的:观察nesprin-1、nesprin-2在心脏发育过程中的表达,探讨nesprin-1、nesprin-2在心脏发育过程中的作用。方法1.取小鼠胚胎（分别为孕12.5天（embryo 12.5,E12.5）、E14.5天、E16.5天、E18.5天）胚胎心脏以及新生鼠、成年鼠心脏,体视解剖显微镜下观察心脏发育同时HE染色观察心脏形态学变化。2.采用RT-PCR检测各时间点nesprin-1、nesprin-2基因的mRNA的表达。3.采用Western-bolt检测各时间点nesprin-1的蛋白表达。4.采用免疫荧光检测各时间点nesprin-1在心肌细胞的定位。结果1.小鼠E12.5天时,房间隔、室间隔开始发育,同时房室瓣也开始形成;E14.5天时,房间隔、室间隔已经形成;E16.5天时房室瓣已经形成;E16.5天和E18.5天时,心肌细胞增殖、变大,使心房和心室壁致密变厚;新生鼠心脏,心肌细胞增大使心室壁增厚,心脏体积随小鼠生长发育而增大;生后心肌细胞由胚胎时期的多边形逐渐过渡到成年时期的短柱状。2.RT-PCR结果显示nesprin-1、nesprin-2在心脏发育过程中表达呈动态变化。Nesprin-1基因mRNA在E12.5天心脏组织中表达已较明显,其表达水平呈逐渐上调趋势,在E16.5天和E18.5天时表达最高,随后表达水平逐渐下调,到成年鼠时期表达最低。Nesprin-2基因mRNA在胚胎12.5天时表达已达最高,随后表达水平逐渐下调,到成年鼠时期表达最低。3.Western-blot结果显示nesprin-1蛋白表达与RT-PCR结果一致,在胚胎16.5天前呈逐渐上调趋势,在16.5和18.5时表达最高,随后又逐渐下调,成年鼠表达最低。4.免疫荧光结果显示nesprin-1在小鼠心脏发育的各个时期均有表达,主要分布在心肌细胞核被膜及其核周间隙。结论:Nesprin-1、nespein-2在小鼠胚胎心脏发育过程中表达呈动态变化,Nesprin-1、nespein-2表达高峰与心脏传导系统、心肌细胞增殖发育时期一致,因此,我们推测nesprin-1、nesprin-2可能对心脏的传导系统发育以及心肌细胞发育中有重要作用。
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相关论文文献
- [1].nesprins基因在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达[J]. 重庆医科大学学报 2010(05)