论文摘要
轮状病毒（Rotavirus,RV）属于呼肠病毒科（Reovrridase）轮状病毒属（Rotaviras）,又名双层病毒（Duoviruses）,是引起婴幼儿和多种幼龄动物急性腹泻的主要病原体。轮状病毒基因中与腹泻有关的是其主要外壳蛋白Vp4和Vp7,是轮状病毒的主要保护性抗原,能够诱导机体产生中和抗体。研制以抗原表位为基础的轮状病毒亚单位疫苗,并利用植物作为生物反应器,生产转基因植物疫苗具有重要的实用价值。本论文将克隆的轮状病毒Vp4Vp7基因的重组轮状病毒多表位RE来替代热不稳定性肠毒素LT的A亚基的LTA1部分,与LT的A2亚基LTA2形成融合基因RE-LTA2,构建了带有信号肽的pr1as-RE-LTA2Ubpuitin-LTB双价植物表达载体。通过农杆菌介导法转化烟草,最终获得表达重组蛋白的转基因烟草。转基因烟草植株经PCR检测分析表明,转基因烟草植株基因组中可检测到RE-LTA2LTB融合基因;提取转基因烟草植株总蛋白质,通过Dot-ELISA、ELISA免疫检测验证了转基因植株表达的重组抗原有免疫原性。将本实验室保存重组质粒pBI121-Vp4、pBI121-Vp7根癌农杆菌EHA105来侵染6-7日龄的杂花苜蓿下胚轴,经愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、生根诱导培养,完成转基因苜蓿植株的再生,得到抗性转基因苜蓿植株。转基因苜蓿植株经PCR检测分析表明,转基因苜蓿植株基因组中可检测到Vp4、Vp7基因;Dot-ELISA、ELISA免疫检测验证了转基因植株表达的重组抗原有免疫原性。本研究为研制重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗、转基因植物口服疫苗提供一条新的途径和方法,具有一定的理论意义和应用前景。
论文目录
相关论文文献
标签：重组轮状病毒多表位论文; 融合基因论文; 植物表达载体的构建论文; 杂花苜蓿论文;