冷冻干燥保存法对人精子形态结构及DNA的影响研究

论文摘要

目的探讨冷冻干燥法对人精子形态结构和DNA的影响,及海藻糖和蛋黄在人精子冷冻干燥保存的保护作用。方法按WHO关于精液判断标准取健康志愿者合格精液48份,其中40份随机分为4组,其中3组分别加入不同的冻干保护剂:ETBS（Tris-HCl缓冲液中加入螫合剂EDTA或EGTA）、ETBS+海藻糖、ETBS+海藻糖+蛋黄;分成冻干A组、冻干B组、冻干C组,给予冷冻干燥处理。1组作为新鲜精液对照组。另外8份精液标本用H2O2处理后直接进行TUNEL实验和彗星实验做为阳性对照组。冻干处理后的3组精子在4℃冰箱中保存3周后取出。对冻干保存后的3组精子标本和新鲜精子标本分别行低渗膨胀实验和电镜形态观测,并用原位缺口末端标记（TUNEL）法和彗星试验进行DNA断裂精子百分率检测。结果①在低膨胀实验中,ETBS组膨胀率为4%,ETBS+海藻糖组为12%,ETBS+海藻糖+蛋黄组为36%。新鲜对照组精子为96%。②电镜观察见精子外部形态的完整性上以ETBS+海藻糖+蛋黄组为最佳,ETBS+海藻糖组次之,ETBS组最差。③ETBS、ETBS+海藻糖组、ETBS+海藻糖+蛋黄组和新鲜精子组DNA断裂精子百分率以TUNEL法检测,分别为（6.39±1.46）%、（5.75±1.29）%、（5.20±1.38）%、（4.94±1.86）%;以彗星试验检测,分别为（6.48±1.58）%、（5.83±1.48）%、（5.28±1.42）%、（5.12±1.65）%。冷冻干燥保存后的各组与新鲜精液相比较,DNA断裂精子百分率差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论①在ETBS的基础上加入海藻糖能显著减小冻干精子膜和尾部破损比例,将海藻糖和蛋黄结合使用时能更好的避免冻干后精子形态的破坏。②以ETBS或ETBS加海藻糖、蛋黄为保护剂的冷冻干燥法对人精子DNA无明显损伤,可有效的保护人精子的DNA。③用海藻糖和蛋黄修正的ETBS保护剂能更好的防止精子结构在冻干过程中产生损伤,比单纯的ETBS冻干保护剂起到的更好的保护效果。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 论文
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附图
• 综述一
• 正文
• 参考文献
• 综述二
• 正文
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢