论文摘要
目的:观察不同葡萄糖浓度对乳鼠心肌细胞培养中自噬的影响方法:体外培养乳鼠心肌细胞,用0.125%胰蛋白酶分离乳鼠心室肌细胞,并用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）纯化心肌细胞;培养24小时后,进行分组。分四组如下:L组:即对照组,葡萄糖（5.5mmol/L）培养的心肌细胞;H组:即高糖组,葡萄糖（25mmol/L）培养的心肌细胞;LR组:即对照+自噬诱导剂组（雷帕霉素100nm/L）;HR组:即高糖+自噬诱导剂组（雷帕霉素100nm/L）。通过光镜观察和鉴定心肌细胞,计算各组心肌细胞面积;用RT-PCR检测心肌肥大标记基因【ANP（atrial natriuretic peptid,心房利钠肽）、β-MHC（β-myosin heavy chain,β-肌球蛋白重链）】和自噬相关基因（Beclin-1）表达情况;运用Western blotting检测自噬标记性蛋白微管相关蛋白3（LC-3）的表达,并比较不同葡萄糖浓度下自噬水平的差异。采用Bandscan 5.0对PCR条带进行光密度测定,采用Sigma Scan Pro 5软件对Western blotting印迹条带进行光密度测定。所有数据采用SSPS17.0统计软件进行统计分析,P﹤0.05为有统计学意义。结果:心肌细胞面积检测、RT-PCR及Western blotting结果均显示:1、高糖组心肌细胞肥大相关指标（心肌细胞面积、ANP和β-MHC基因表达）较对照组升高,差异有统计学意义（P﹤0.05）;高糖组自噬相关指标（beclin-1基因表达和LC-3表达）较对照组减低,差异有统计学意义。2、高糖+自噬诱导剂组心肌细胞肥大相关指标较对照+自噬诱导剂组升高,但差异无统计学意义;高糖+自噬诱导剂组自噬相关指标较对照+自噬诱导剂组减低,但差异无统计学意义。3、高糖+自噬诱导剂组心肌细胞肥大相关指标较高糖组减低,差异有统计学意义;高糖+自噬诱导剂组自噬相关指标较高糖组升高,差异有统计学意义。4、对照+自噬诱导剂组的心肌细胞肥大相关指标较对照组减低,但差异无统计学意义;对照+自噬诱导剂组的自噬相关指标较对照组升高,但差异无统计学意义。结论:1、培养基中葡萄糖浓度升高可导致心肌细胞肥大,同时合并有心肌细胞自噬水平的下降。2、在高糖培养基中加入自噬诱导剂可升高心肌细胞的自噬水平,同时抑制高糖导致心肌细胞肥大效果。3、培养基中葡萄糖浓度升高导致心肌细胞肥大的效果可能与心肌细胞自噬水平的改变相关。4、结合本实验的研究结果,我们推测自噬在糖尿病性心肌病方面起一定作用。自噬如何阻止心肌肥大和糖尿病性心肌病发生需要进一步研究,这可能为糖尿病性心肌病临床治疗提供新的靶点。
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