脑梗死后康复治疗最佳时间窗及其机理的研究

论文摘要

第一部分不同时间窗电针治疗大鼠脑梗死的实验研究目的：探寻电针治疗大鼠脑梗死的最佳时间窗及其作用机制。方法：SD大鼠随机分为正常组、假于术组、模型组及电针治疗组,每组又根据术后治疗干预时间点细分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。采用线栓法将模型组及电针治疗组大鼠制成左侧大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型,缺血90min后再灌注。电针治疗组各亚组分别于脑缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h实施电针治疗,而正常组、假手术组及模型组各亚组均于上述相应时间点给予假电针治疗,疗程为14d。采用神经功能缺损评分（NSS）对各亚组人鼠进行评分,Morris水迷宫检测其学习记忆能力的变化,功能性核磁共振技术监测其梗死灶体积及局部代谢的变化,TUNEL法检测梗死区域凋亡细胞数,免疫组化法观察梗死区域Caspase-3及Nestin的表达,实时荧光定量PCR技术检测梗死区域Bcl-2 mRNA及BDNF mRNA的表达。结果：同一时间窗小同组比较：治疗组MCAO/R大鼠的NSS评分、梗死灶体积、凋亡阳性细胞数、Caspase-3表达及逃避潜伏期均明显低于模型组（P<0.05）,而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA及Nestin阳性细胞数在治疗组的表达均明显高于模型组（P<0.05）。同一组不同时间窗比较：NSS评分24h内亚组和24h后亚组之间有明显差异（P<0.05）,上述各数据不同治疗时间窗亚组之间（其中除Naa/Cr比值48h和72h亚组之间,Caspase-3表达12h和24h亚组之间,nestin阳性细胞数12h与24h亚组之间无差异外）均有明显差异（P<0.05）,其中逃避潜伏期、梗死体积及凋亡细胞数以术后12h亚组均值相对较低,Caspase-3表达以术后24h亚组均值相对较低,而Naa/Cr值、nestin阳性细胞数、BDNFmRNA及Bcl-2mRNA表达水平以术后12h亚组均值相对较高。结论：电针治疗能够促进脑梗死大鼠的神经功能恢复,存在治疗时间窗效应,其最佳的治疗时间窗为：12h-24h。电针可能通过缩小梗死灶体积,改善局部脑代谢,抑制神经元凋亡及激活内源性神经干细胞等来发挥其促进脑梗死后神经功能恢复的作用。第二部分不同时间窗经颅磁刺激治疗大鼠脑梗死的实验研究目的：探寻经颅磁刺激治疗大鼠脑梗死的最佳时间窗及其作用机制。方法：SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及经颅磁刺激治疗组,每组又根据术后治疗干预时间点细分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。采用线栓法将模型组及电针治疗组大鼠制成左侧大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型,缺血90min后再灌注。经颅磁刺激治疗组各亚组分别于脑缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h实施磁刺激治疗,而正常组、假手术组及模型组各亚组均于上述相应时间点给予假磁刺激治疗,疗程为14d。采用神经功能缺损评分（NSS）对各亚组大鼠进行评分,Morris水迷宫检测其学习记忆能力的变化,功能性核磁共振技术监测其梗死灶体积及局部代谢的变化,TUNEL法检测梗死区域凋亡细胞数,免疫组化法观察梗死区域Caspase-3及Nestin蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测梗死区域Bcl-2mRNA及BDNFmRNA的表达。结果：同一时间窗不同组比较：治疗组MCAO/R大鼠的NSS评分、梗死灶体积、凋亡阳性细胞数、Caspase-3表达及逃避潜伏期均明显低于模型组（P<0.05）,而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA及Nestin阳性细胞数在治疗组的表达均明显高于模型组（P<0.05）。同一组不同时间窗比较：上述各数据不同治疗时间窗亚组之间（其中除NSS评分6h与72h亚组之间,12h、24h与48h亚组之间,梗死体积.Naa/Cr比值及Caspase-3表达均12h与24h亚组之间无差异外）均有明显差异（P<0.05）,其中NSS评分、逃避潜伏期、梗死体积、凋亡细胞数及Caspase-3表达以术后24h亚组均值相对较低,而Naa/Cr值及BDNFmRNA表达水平以术后24h亚组均值相对较高,nestin口性细胞数及Bcl-2mRNA表达水平以术后12h亚组均值相对较高。结论：经颅磁刺激治疗可以促进MCAO/R大鼠的神经功能恢复,且不同治疗时间窗促进其恢复的程度不同,存在一个最佳治疗时间窗：12h-24h。其机制可能是通过激活梗死灶周围内源性神经细胞,建立新的突触,改善局部脑代谢,抑制神经元凋亡从而缩小梗死灶体积等来发挥其促进脑梗死后神经功能恢复的作用。第三部分不同时间窗电针结合经颅磁刺激治疗大鼠脑梗死的实验研究目的：探寻电针结合经颅磁刺激治疗大鼠脑梗死的最佳时间窗及其作用机制。方法：SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及电针结合经颅磁刺激治疗组,每组又根据术后治疗干预时间点细分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。采用线栓法将模型组及电针治疗组大鼠制成左侧大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型,缺血90min后再灌注。治疗组各亚组分别于脑缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48h及72 h实施电针和磁刺激治疗,而正常组、假手术组及模型组各亚组均于上述相应时间点给予假电针及磁刺激治疗,疗程为14d。采用功能缺损评分（NSS）对各亚组大鼠进行神经功能评分,Morris水迷宫检测其学习记忆能力的变化,功能性核磁共振技术监测其梗死灶体积及局部代谢的变化,TUNEL法检测梗死区域凋亡细胞数,免疫组化法观察梗死区域Caspase-3及Nestin的表达变化,实时荧光定量PCR技术检测梗死区域Bcl-2 mRNA及BDNF mRNA的表达变化。结果：同一时间窗不同组比较：治疗组MCAO/R大鼠的NSS评分、梗死灶体积、凋亡阳性细胞数、Caspase-3表达及逃避潜伏期均明显低于模型组（P<0.05）,而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA及Nestin阳性细胞数在治疗组的表达均明显高于模型组（P<0.05）。同一组不同时间窗比较：上述各数据不同治疗时间窗亚组之间（其中除NSS评分6h、12h与72h亚组,24h与48h亚组之间,梗死体积及Naa/Cr比值24h与48h亚组之间无差异外）均有明显差异（P<0.05）,其中NSS评分、逃避潜伏期、梗死体积、凋亡细胞数及Caspase-3表达以术后24h亚组均值相对较低,而nestin阳性细胞数、Naa/Cr值及Bcl-2mRNA表达水平以术后24h亚组均值相对较高,BDNFmRNA表达水平以术后48h亚组均值相对较高。结论：电针结合经颅磁刺激治疗可以促进MCAO/R大鼠的神经功能恢复,且不同治疗时间窗促进其恢复的程度不同,过早或者过晚其疗效均欠佳。存在一个最佳治疗时间窗：24h-48h。其机制可能与激活动物内源性神经干细胞并促进新的突触形成从而重塑神经功能,减少缺血引起的神经元凋亡,缩小脑梗死体积等有关。第四部分不同时间窗被动运动治疗大鼠脑梗死的实验研究目的：探寻被动运动治疗大鼠脑梗死的最佳时间窗及其作用机制。方法：SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组及被动运动治疗组,每组又根据术后治疗干预时间点细分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。采用线栓法将模型组及被动运动治疗组大鼠制成左侧大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型,缺血90min后再灌注。治疗组各亚组分别于脑缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h实施被动运动治疗,而正常组、假手术组及模型组各亚组均于上述相应时间点给予假被动运动治疗,疗程为14d。对各亚组大鼠进行神经功能缺损评分（NSS）,采用Morris水迷宫检测其学习记忆能力的变化,功能性核磁共振技术监测其梗死灶体积及局部代谢的变化,TUNEL法检测梗死区域凋亡细胞数,免疫组化法观察梗死区域Caspase-3及Nestin的表达的变化,实时荧光定量PCR技术检测梗死区域Bcl-2mRNA及BDNF mRNA表达的变化。结果：同一时间窗不同组比较：治疗组MCAO/R大鼠的NSS评分、梗死灶体积、凋亡阳性细胞数、Caspase-3表达及逃避潜伏期均明显低于模型组（P<0.05）,而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA及Nestin阳性细胞数在治疗组的表达均明显高于模型组（P<0.05）。同一组不同时间窗比较：上述各数据不同治疗时间窗亚组之间（其中除NSS评分6h、12h与72h亚组,24h与48h亚组之间,梗死体积及Naa/Cr比值24h与48h亚组之间,凋亡阳性细胞数6h与72h亚组之间无差异外）均有明显差异（P<0.05）,其中NSS评分、逃避潜伏期、梗死体积、凋亡细胞数及Caspase-3表达以术后24h亚组均值相对较低,而nestin阳性细胞数、Naa/Cr值、Bcl-2mRNA及BDNFmRNA表达以术后24h亚组均值相对较高。结论：被动运动治疗可以促进MCAO/R大鼠的神经功能恢复,且不同治疗时间窗促进其恢复的程度不同,过早开始被动运动治疗疗效欠佳,存在一个最佳治疗时间窗：24h。治疗机制可能与其能够减少缺血半暗带区的神经元凋亡,缩小梗死体积,且可以激活梗死灶周边皮质的内源性神经干细胞及促进神经营养因子的表达从而修复受损神经元并促进神经元重塑等有关。

论文目录

• 前言
• 参考文献
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 不同时间窗电针治疗大鼠脑梗死的实验研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第二部分 不同时间窗经颅磁刺激治疗大鼠脑梗死的实验研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第三部分 不同时间窗电针结合经颅磁刺激治疗脑梗死大鼠的实 验研究
• 1 实验材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第四部分 不同时间窗被动运动治疗大鼠脑梗死的实验研究
• 1 实验材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 附图
• 综述 脑梗死缺血半暗带神经元凋亡与治疗时间窗的研究进展
• 参考文献
• 附表
• 附录一 攻读学位期间发表论文目录
• 附录二 英文缩略词表
• 致谢