两种多环芳烃对孔石莼的生物毒性及氧化胁迫研究

论文摘要

本课题以孔石莼作为研究对象,通过在海水中添加菲和芘两种多环芳烃类毒性试剂的方法,采用不同浓度毒性,不同处理时间对孔石莼进行暴露试验,研究菲和芘对孔石莼的生物毒性和氧化胁迫。提供两种污染物毒性效应的基础研究数据,并对污染的状况进行初步评价。生物毒性实验的暴露处理时间为96h,以生长抑制作用和叶绿素含量为观察指标,得到实验结果为:1.菲暴露处理96h后,在浓度为0.1mg/L时未对孔石莼生长起到抑制作用,且叶绿素含量高于对照组,其余各浓度处理均起到抑制作用,且表现为极显著差异;2.芘暴露处理96h后,生长抑制的结果呈现剂量效应关系,而叶绿素含量各处理组含量均低于对照组。氧化损伤效应实验的暴露处理时间分别为6h和72h,以MDA、H2O2含量,SOD、CAT活性,抗氧化相关酶Mnsod和CAT表达水平为观测指标。得到实验结果为1.经过处理的样品中MDA和H2O2含量均有升高,2.在菲处理6h,菲浓度0.1mg/L时,SOD和CAT的活性均被激活,在菲浓度为24.3mg/L时二者均达到极显著差异,但达到显著差异的临界浓度有所不同;在菲处理72h时,SOD和CAT的活性与菲的浓度呈剂量-效应关系;3.在芘处理6h,芘浓度为1.5-13.5μg/L时,SOD活性略有上升,其余浓度活性下降;各处理组CAT活性均低于对照组,在浓度121.5μg/L时即达到差异极显著;在芘处理72h时,SOD活性与浓度呈剂量-效应关系,处理组CAT活性低于对照组,在364.5μg/L时差异极显著。4.在菲处理组,SOD活性在6h高浓度和72h高浓度时,才与对照组相比有显著差异,所以,不建议选用菲处理SOD活性作为检测指标。检测MDA含量时发现,在菲处理组和芘处理组中,MDA需要72h的时间累积才能达到敏感浓度,所以,也不建议选取MDA作为预警检测指标。5.采用RT-PCR试验方法,在菲处理6h和72h,浓度为0.1mg/L时,Mnsod和CAT表达均开始上调;芘处理6h,在浓度为1.5μg/L时Mnsod和CAT均开始上调;处理时间增加到72h时,Mnsod和CAT表达均下调。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 立题背景
• 1.2 国内外研究状况
• 1.2.1 国外海洋污染概况
• 1.2.2 我国海洋污染概况
• 1.2.3 海洋污染对生物系统多态性的破坏
• 1.2.4 持久性有机污染物（POPs）
• 1.2.5 多环芳烃
• 1.2.6 抗氧化防御系统
• 1.3 本课题研究的目的和意义
• 1.4 本课题研究的主要内容
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 孔石蒓的人工模拟培养
• 2.2 实验仪器及设备
• 2.3 实验内容及方法
• 2.3.1 毒性溶液的配制
• 2.3.2 暴露实验
• 2.3.3 叶绿素的提取和测定
• 2.3.4 蛋白含量标准曲线的制备
• 2.3.5 组织匀浆的制备
• 2.3.6 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定
• 2.3.7 过氧化氢酶（CAT）活性的测定
• 2.3.8 脂质过氧化物（MDA）含量测定
• 20₂）含量测定'>2.3.9 过氧化氢（H₂0₂）含量测定
• 2.3.10 蛋白质含量的测定
• 2.3.11 RNA 的提取
• 2.3.12 cDNA 的合成
• 2.3.13 聚合酶链式反应PCR
• 2.4 数据处理及分析
• 第3章 PAHs 对孔石莼生长的影响
• 3.1 PAHs 对孔石莼生长的影响
• 3.2 PAHs 对孔石莼叶绿素含量的影响
• 3.3 本章小结
• 第4章 PAHs 对孔石莼氧化损伤的评价
• 4.1 蛋白质测定标准曲线的制作
• 4.2 PAHs 对SOD 活性的影响
• 4.3 PAHs 对CAT 活性的影响
• 4.4 PAHs 对MDA 活性的影响
• 20₂活性的影响'>4.5 PAHs对H₂0₂活性的影响
• 4.6 本章小结
• 第5章 PAHs 对孔石莼氧化损伤相关基因表达水平的研究
• 5.1 孔石莼RNA 的提取
• 5.2 内参α-tubulin 的PCR 温度的确定及PCR 产物与模板含量的线性关系的确定
• 5.3 氧化应激相关基因表达的研究
• 5.3.1 引物的设计
• 5.3.2 PCR 反应条件的确定
• 5.3.3 氧化应激相关基因表达结果
• 5.4 综合比较结果
• 5.4.1 菲处理孔石莼Mnsod 和CAT 相对转录水平
• 5.4.2 芘处理孔石莼Mnsod 和CAT 相对转录水平
• 5.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢