抗血小板药物及CD40-CD40L信号系统对动脉粥样硬化影响的实验研究

论文摘要

第一部分阻断CD40信号系统对动脉粥样硬化的影响背景：动脉粥样硬化（AS）是动脉血管的一种慢性炎症，CD40-CD40配体（CD40L）系统作为重要的炎症信号通路，可能是AS发病的关键环节，与斑块的发生和发展密切相关。抑制CD40-CD40L信号通路在AS防治中的作用及其机制越来越多的引起关注，但能否通过阻断CD40信号这一途径延缓AS病变的进展、改变AS斑块的结构尚有争议。目的：选用载脂蛋白E（apoE）基因敲除小鼠并予以高脂饮食建立AS动物模型，以抗小鼠CD40L抗体阻断CD40-CD40L系统，观察其对AS病变的影响，为防治AS提供可能的新的思路。方法：8周龄雄性apoE基因敲除小鼠随机分为模型对照组（n=10）和抗CD40L抗体组（n=8，250ug／0.5mL腹腔注射，2次／周），予以西方饮食喂养，高脂饮食及治疗持续16周。取近交系C57BL／6小鼠（n=6）作为正常对照。测血脂、可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-1）和可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）浓度；观察主动脉组织病理形态学改变；免疫组织化学法测定斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞百分率；Western杂交分析测定基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的蛋白表达。结果：与模型组比较，抗CD40L抗体治疗可明显降低血sVCAM-1和sICAM-1的浓度（P＜0.01），对血脂无影响（P＞0.05）；减轻主动脉AS病变，斑块大体面积、斑块／内膜面积比、斑块截面积与主动脉管壁厚度均显著减小（P＜0.05）；并可减少斑块部位巨噬细胞数量，增加平滑肌细胞数量（P＜0.05），降低MMP-9的表达（P＜0.01），斑块趋于稳定。结论：阻断CD40-CD40配体系统可使血清可溶性粘附分子浓度下降，抑制炎症反应，从而减轻动脉粥样硬化病变，稳定斑块，对血脂无影响。第二部分阿司匹林及氯吡格雷抑制动脉粥样硬化进展及其机制研究背景：血小板作为一种炎症细胞，在动脉粥样硬化（AS）的发生发展中起着重要的作用，新近的研究表明抗血小板药物可抑制斑块进展，但其作用机制并不明确。本研究第一部分结果表明，CD40-CD40配体（CD40L）系统作为重要的炎症信号通路，阻断其作用可减轻AS病变，并稳定斑块。抗血小板治疗能否通过抑制血小板活化从而阻断CD40-CD40L系统，进而延缓斑块进展，稳定斑块，目前尚不清楚。目的：选用载脂蛋白E（apoE）基因敲除小鼠并予以高脂饮食建立AS动物模型，观察抗血小板药物阿司匹林和氯吡格雷及其合用对AS病变的作用，并探讨抗血小板治疗对CD40-CD40L系统的影响，为临床应用抗血小板治疗提供进一步的依据。方法：8周龄雄性apoE基因敲除小鼠随机分为模型对照组（n=10）、阿司匹林组(n=10，58mg／kg·d-1灌胃)、氯吡格雷组(n=10，14mg／kg·d-1灌胃)、抗血小板药物合用组(n=10，阿司匹林58mg／kg·d-1和氯吡格雷14mg／kg·d-1灌胃)。予以西方饮食喂养，高脂饮食及治疗持续16周。取近交系C57BL／6小鼠（n=6）作为正常对照。检测血脂、可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-1）、可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）浓度和可溶性CD40L（sCD40L）；测定血小板表达CD40L的水平；观察主动脉组织病理形态学改变；免疫组织化学法测斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞及CD40L表达的阳性百分率。结果：与模型组比较，阿司匹林和氯吡格雷可显著降低血sVCAM-1、sICAM-1的浓度，对血脂无影响（P＞0.05）；减轻主动脉AS病变，斑块大体面积、斑块／内膜面积比、斑块截面积与主动脉管壁厚度均显著减小（P＜0.05）；并可明显减少斑块部位巨噬细胞的数量，增加平滑肌细胞的数量（P＜0.05）。对血sCD40L、血小板和斑块部位CD40L表达的抑制作用，氯吡格雷强于阿司匹林（P＜0.05），其他方面两药无显著性差异（P＞0.05）。阿司匹林和氯吡格雷联合用药，则无论是对炎性指标、AS病变程度、斑块稳定性，还是对CD40信号系统的抑制作用，均强于单用阿司匹林或氯吡格雷（P＜0.05）。结论：阿司匹林和氯吡格雷可通过抑制CD40-CD40L系统，抑制炎症反应，减轻AS病变，稳定斑块，两药联用，则作用更强。第三部分阿司匹林、氯吡格雷与抗CD40L抗体联合治疗对动脉粥样硬化的影响背景：研究证实，抗血小板治疗及应用抗CD40配体（CD40L）抗体阻断CD40-CD40L系统均可延缓动脉粥样硬化（AS）病变的进展，稳定AS斑块的结构。然而，AS的发生、发展是一种多因素、多环节的复杂过程，单一治疗决不是最佳方案，联合治疗则可从不同途径更为有效全面的干预AS。目的：选用载脂蛋白E（apoE）基因敲除小鼠并予以高脂饮食建立AS动物模型，观察抗血小板治疗、抗CD40L抗体治疗及其合用对AS病变的作用，为临床防治AS提供新的方向和依据。方法：8周龄雄性apoE基因敲除小鼠随机分为模型对照组（n=10）、抗血小板药物组(n=10，阿司匹林58mg／kg·d-1和氯吡格雷14mg／kg·d-1灌胃)、抗CD40L抗体组（n=8，250ug／0.5mL腹腔注射，2次／周）、合用组(n=9，阿司匹林58mg／kg·d-1和氯吡格雷14mg／kg·d-1灌胃+抗CD40L抗体250ug／0.5mL腹腔注射，2次／周)。予以西方饮食喂养，高脂饮食及治疗持续16周。取近交系C57BL／6小鼠（n=6）作为正常对照。检测血脂、可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-1）、可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）浓度；观察主动脉组织病理形态学改变；免疫组织化学法测斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞；Western杂交分析测定基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。结果：阿司匹林联用氯吡格雷、抗CD40L抗体治疗均可明显降低血sVCAM-1和sICAM-1的浓度（P＜0.01）对血脂无影响（P＞0.05）；减轻动脉粥样硬化病变，斑块大体面积、斑块／内膜面积比、斑块截面积与主动脉管壁厚度均显著减小（P＜0.05）；并可减少斑块部位巨噬细胞的数量，增加平滑肌细胞德数量（P＜0.05）。阿司匹林联用氯吡格雷、抗CD40L抗体治疗的疗效相似（P＞0.05）；阿司匹林、氯吡格雷及抗CD40L抗体合用则作用增强（P＜0.05）。抗CD40L抗体可降低基质金属蛋白酶-9的表达（P＜0.01），抗血小板治疗无此作用（P＞0.05）。结论：应用阿司匹林和氯吡格雷进行抗血小板治疗与采用抗CD40L抗体阻断CD40信号均可抑制炎症反应，减轻AS病变，稳定斑块，疗效相似，联合治疗则有协同作用。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 阻断CD40信号系统对动脉粥样硬化的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 阿司匹林及氯吡格雷抑制动脉粥样硬化进展及其机制研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第三部分 阿司匹林、氯吡格雷与抗CD40L抗体联合治疗对动脉粥样硬化的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢