微小隐孢子虫子孢子黏附相关蛋白质的筛选及定位

论文摘要

为了筛选微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因,提取微小隐孢子虫总RNA并分离mRNA,通过反转录酶合成cDNA,将EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端连到双链cDNA的两端,定向插入到T7 Select 10-3b载体,用包装蛋白进行包装并对初始文库进行扩增,构建微小隐孢子虫噬菌体展示文库。用微小隐孢子虫易感的Caco-2细胞和高免血清对构建好的文库进行筛选,并对筛选得到的部分蛋白质进行定位。本试验构建的微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库未扩增文库的滴度为3.3×107pfu/mL,文库容量为1.0×107个重组子,文库重组率为94%,92%的插入片段大于300bp,扩增后文库滴度为3.1×1010pfu/mL。用Caco-2细胞筛选到5个微小隐孢子虫黏附相关蛋白质,其中1个为已知蛋白质CP2,已有报道推测其参与子孢子与宿主上皮细胞的黏附过程。其余4个蛋白质功能未知。用微小隐孢子虫高免血清筛选到3个蛋白质,其中1个为已知蛋白质CP2,另2个蛋白质功能未知。对筛选出来的两个蛋白质基因（CP389和CP245）的部分编码区进行原核表达,分别命名为rCP389和rCP245,通过免疫荧光定位证实,CP389和CP245在卵囊壁和子孢子表面均有表达,推测筛选得到的蛋白质可能参与了子孢子与宿主的黏附过程。本研究为揭示隐孢子虫的致病机制提供了依据。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 微小隐孢子虫黏附蛋白的研究进展
• 1 微小隐孢子虫主要的黏附蛋白
• 2 黏附蛋白的应用
• 3 结语
• 第二篇 研究内容
• 第一章 微小隐孢子虫T7 噬菌体展示文库的构建
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 用Caco-2细胞筛选微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 用高免血清筛选微小隐孢子虫T7 噬菌体展示文库
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 微小隐孢子虫黏附蛋白CP389、CP245 的表达及定位
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• 中文摘要
• Abstract