鸡球虫多价卵黄抗体IgY的制备及其抗球虫效果评价

论文摘要

鸡球虫病（Coccidiosis）主要由艾美耳属（Eimeria）的肠道原生寄生虫引起,是目前严重危害养鸡业的寄生虫疾病之一。我国作为一个养鸡大国,鸡球虫病严重制约了我国养鸡业的发展。鸡球虫病防治一直以药物为主,但药物的长期广泛使用,出现了耐药虫株和食品中抗球虫药物残留等问题,危害到人们的身体健康,而昂贵的新药开发费用和严格的药物残留标准等原因,使抗球虫药的研制和使用受到了极大的限制。很多学者试图从免疫的角度来预防该病,如使用活疫苗、强毒活疫苗等,但疫苗的使用会出现毒力返强和容易致病等问题,因此急需开发无药物残留且安全可靠的绿色抗球虫产品。近年来,随着特异性卵黄抗体在动物疾病方面的成功应用,通过抗球虫的卵黄抗体防治球虫病成为球虫病防控的新途径,本文利用球虫活卵囊免疫产蛋母鸡,将制备的抗球虫卵黄抗体作为饲料添加剂饲喂雏鸡,使雏鸡产生一定程度的被动免疫保护,为进一步在临床上利用卵黄抗体防治鸡球虫病奠定了基础。1、抗鸡球虫多价卵黄抗体IgY的制备与鉴定将扩增纯化的柔嫩、巨型、早熟艾美耳球虫活卵囊按照一定的比例混合为免疫原,对60日龄蛋鸡进行口服免疫,共免疫六次。每次免疫前采集鸡外周血液分离血清,产蛋后每隔一段时间取蛋分离卵黄抗体,用建立的间接ELISA方法进行血清和鸡蛋抗体水平的动态监测。对饱和硫酸铵法提取IgY的最适水稀释倍数和最适pH值进行了优化,建立了鸡蛋中IgY的提取及纯化方法。通过SDS-PAGE电泳法对提纯的抗球虫IgY进行纯度测定,通过ELISA方法对IgY的理化稳定性进行检测。结果表明,卵囊首免后鸡血清中球虫抗体逐渐上升,二免后15d血清抗体达到较高水平,五免后出现短暂时间内的小幅度下降,六免后15d达到峰值。蛋中抗体五免时已经处于较高水平,六免加强免疫后,抗体水平稳步上升。采用饱和硫酸铵法提取IgY时卵黄液的最佳稀释倍数9倍,最适pH为5.1。SDS-PAGE分析表明,提纯的卵黄抗体由70KDa左右的重链和40KDa左右的轻链组成,纯度达98%,效价达1：140000/mg,理化稳定性检测表明提取的卵黄抗体具有良好的热稳定性和酸碱稳定性。通过提取后冷冻干燥,共计获得145g的卵黄抗体,为开展实验室和田间抗球虫评价奠定了坚实的基础。2、鸡球虫多价卵黄抗体IgY抗球虫效果评价将已制备的纯度及生物学活性均较好的抗球虫卵黄抗体冻干粉按照0.01%、0.02%、0.05%、0.1%、0.5%、1%的浓度添加到预混饲料中饲喂1日龄黄羽肉鸡,连续饲喂10d,同时设立未添加阴性、未添加阳性和盐霉素防治对照组,每组20只鸡。于10日龄时,除未添加阴性对照组外每组每鸡经嗉囊接种1×104个E.tenella孢子化卵囊,8d后称重扑杀,对各组的存活率、相对增重率、病变减少率、相对卵囊产量和抗球虫指数（ACI）等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。结果表明,综合各项指标,1%IgY添加组、0.5%IgY添加组免疫保护力稍低于药物对照组,但均显著好于其他各添加组；饲喂IgY能使鸡体产生显著的被动免疫保护力,虽然用IgY进行抗球虫免疫预防要比用药物预防效果略低,但无疑安全性更好,考虑制备成本,推荐IgY使用浓度为0.5%。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 文献综述一 鸡球虫病免疫防治研究进展
• 1、鸡球虫病原体及生活史
• 2、鸡球虫病临床症状
• 3、鸡球虫病病理变化
• 4、鸡抗球虫的免疫学研究
• 5、鸡球虫病的免疫防治
• 6、总结与展望
• 7、参考文献
• 文献综述二 鸡卵黄抗体IgY研究进展
• 1、鸡卵黄抗体的形成
• 2、鸡卵黄抗体的特性
• 3、影响鸡卵黄抗体产生的主要因素
• 4、鸡卵黄抗体的作用机理
• 5、鸡卵黄抗体的提取和纯化
• 6、鸡卵黄抗体的应用
• 7、总结与展望
• 8、参考文献
• 第一章 抗鸡球虫多价卵黄抗体IgY的制备与鉴定
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、小结与讨论
• 4、参考文献
• 第二章 鸡球虫多价卵黄抗体IgY抗球虫效果评价
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、小结与讨论
• 4、参考文献
• 全文小结
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文