OGD/R模型诱导SH-SY5Y细胞凋亡的蛋白质组学研究

论文摘要

脑缺血-再灌注损伤（I/R）是神经系统的常见多发病，属于导致人类死亡的三大疾病范畴，对其发病机制及治疗措施的研究倍受关注。目前研究认为由I/R诱导产生的迟发性神经元死亡（主要是凋亡）是造成神经功能障碍和缺失进行性加重的根源。对于缺血性神经元凋亡机制的研究经过了一个逐步积累的渐进过程，涉及凋亡相关的各种损伤因素，信号转导通路，基因活化与抑制，蛋白质合成调节、修饰。研究结果显示凋亡的调控是一个整合多因素多环节的复杂网络系统，很多具体机制还有待进一步探索，特别是关于凋亡蛋白表达、加工处理、修饰、相互作用等蛋白质组方面的研究还处于起步阶段。本研究在体外构建了人成神经细胞瘤系SH-SY5Y细胞的OGD/R模型，来模拟脑缺血-再灌注损伤，并通过病理学、生理、生化等多项指标的检测证实该模型能够成功诱导细胞凋亡的发生。首次采用二维差异凝胶电泳（2D-DIGE）和基质-辅助激光解析/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术分析了OGD/R模型诱导SH-SY5Y细胞凋亡的蛋白质组学改变，鉴定出7个差异表达蛋白：Crystal structure of the XiapCaspase-7 complex、Usurpin-gamma、原癌基因丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-1、角鲨烯合成酶、转谷氨酰氨酶3、锌指蛋白DPF3和Sptin2，它们功能上分别与凋亡抑制、细胞代谢、损伤防御、转录调节和细胞骨架构建相关。本研究结果为进一步研究I/R诱导神经元凋亡的发生机制和治疗靶点的合理筛选提供了有价值的线索。

论文目录

• 提要
• 缩略词索引
• 绪论
• 一.脑缺血-再灌注损伤与神经元凋亡
• 1 脑缺血-再灌注损伤的始动因素
• 2 脑缺血-再灌注诱导神经元凋亡的信号通路
• 3 神经元凋亡相关基因的启动及其蛋白的表达
• 二.脑缺血性疾病的蛋白质组学研究进展
• 1 蛋白质组学的概念及主要研究技术
• 2 脑缺血性疾病的蛋白质组学研究
• 第一部分 诱导SH-SY5Y 细胞凋亡的OGD/R 模型建立 .
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 不同时间OGD 处理对SH-SY5Y 细胞活力的影响
• 2.1.1 台盼兰拒染法检测细胞存活率
• 2.1.2 MTT 法检测细胞活力
• 2.2 SH-SY5Y 细胞的形态学变化
• 2.2.1 倒置显微镜
• 2.2.2 H&E 染色
• 2.2.3 Hoechst 33342 染色
• 2.2.4 AO/EB 染色
• 2.2.5 透射电镜
• 2.3 细胞氧化应激相关酶及代谢物的变化
• 2.3.1 培养液中LDH 水平
• 2.3.2 细胞中MDA 含量
• 2.3.3 细胞中SOD 活力
• 2.4 流式细胞术分析
• 2.4.1 细胞周期检测
• 2.4.2 AnnexinV-FITC 与PI 双染细胞凋亡率检测
• 3 讨论
• 第二部分OGD/R 模型诱导SH-SY5Y 细胞凋亡的蛋白质组学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法及统计学处理
• 2 结果
• 2.1 对照组和OGD/R 组蛋白质表达差异分析
• 2.2 差异蛋白点的质谱鉴定
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表的论文
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢