论文摘要
鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease, IBD）是由传染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的鸡的一种高度接触性传染病。病毒在法氏囊的B淋巴细胞中迅速繁殖,损伤法氏囊的B淋巴细胞,引起严重的免疫抑制,从而导致疫苗免疫失败和继发感染的发生,对养鸡业造成严重的经济损失。IBDV属于双RNA病毒科的成员,病毒基因组由A,B两个片段的双股RNA组成。其中,基因组B片段编码病毒蛋白VP1,它是一种RNA依赖性的RNA聚合酶;基因组A片段包含2个部分重叠的开放阅读框架（ORF）,小ORF编码分子量为17kDa的非结构蛋白VP5;大ORF编码一种分子量约110kDa的前体多聚蛋白,该蛋白在翻译后进一步加工形成VP2、VP3利VP4,形成IBDV的结构蛋白,参与病毒核衣壳的形成,携带病毒主要中和性B细胞抗原表位,诱导中和性抗体的产生。 B细胞抗原表位又称抗原决定簇,是抗原分子上能够被抗体分子识别的部位,在蛋白质抗原中一股由几个直接相邻或构象上相邻的氨基酸组成,决定着机体产生抗体的特异性,是诱导体液免疫的基本单位。对以体液免疫反应为主的IBDV来说,鉴定其B细胞抗原表位便是揭示IBD体液免疫的本质。本项研究应用基因工程技术构建了VP2基因原核表达载体pETVP2,并在大肠杆菌中诱导表达了鸡IBDV主要结构蛋白VP2。表达蛋白能够与鸡IBDV抗血清和单抗发生特异性反应,应用该表达蛋白鉴定出11株单克隆抗体识别VP2蛋白。 在应用生物信息学原理分析鸡IBDV VP2蛋白结构特性的基础上,合成了VP2 16-mer重叠多肽51条,VP2 12-mer重叠多肽64条,合成多肽与载体蛋白BSA偶联后,经peptide-ELISA利Dot-ELISA检测其与鸡IBDV单克隆抗体和多抗的反应性。结果显示,VP2中含有5个中和性单克隆抗体识别的线性表位:EP1:37TLRSETSTYNLTV49;EP2:76SNGNYKF82;EP3:201DRPRVYTITAADDYQFS217;EP4:326SWSARGSLAVTI337;EP5:403SERDRLGIKTVW414和6个多抗反应位点:ES1:91NLPASYNYCRLVSRSLTV108;ES2:331GSLAVTIHGGNYPGALRPVTLV352;ES3:371FELIPNPELAKNLVTEYG388;ES4:433NSPLKIAGAFGFK445;ES5:449RAIRRIAVPVVS460;ES6:495ASGKARAASGRIRQLTLA512。VP2单克隆抗体识别的抗原表位多肽同时也能够与鸡IBDV多抗反应。 通过重叠多肽合成技术和单克隆抗体抑制实验证明单克隆抗体YNW17识别VP2表位的氨基酸序列为:197CDSSDRPRVYTIT209;单克隆抗体YNW29识别表位的序列为:329ARGSLAVTI337。进一步精确定位了表位EP3和EP4的序列范围。 通过本项研究,详细地绘制了鸡IBDV VP2蛋白的抗原表位图谱,对揭示IBDV体液免疫产生的本质具有重要意义,同时为设计IBD新型表位疫苗奠定了基础。
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