人宫颈鳞状上皮永生化细胞和癌细胞的核蛋白质组及微管蛋白比较分析

论文摘要

目的:对比分析HPV16阳性的人宫颈鳞状上皮永生化细胞（H8细胞株）和宫颈癌细胞（Caski细胞株）核蛋白质组和骨架蛋白α、β、γ–微管蛋白的表达差异,识别并鉴定核蛋白质组差异表达的蛋白质,为宫颈癌癌变机制和抗癌药物靶点的选择提供亚细胞层面的信息。方法:①采用MERCK公司亚细胞结构蛋白质提取试剂盒Calbiochem?分步提取H8细胞和Caski细胞的核蛋白和骨架蛋白。②利用固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）双向凝胶电泳（2-dimensronal gel electrophoresis, 2-DE）分别获得两株细胞的核蛋白双向电泳图谱,图像分析筛选差异表达蛋白斑点,MALDI-TOF-MS鉴定蛋白质。③采用免疫细胞化学SP法检测α、β–微管蛋白在H8细胞和Caski细胞中的表达差异,并用Western blotting对骨架蛋白α、β、γ–微管蛋白在两株细胞中的表达水平进行半定量分析。结果:①从H8细胞和Caski细胞的细胞核蛋白2-DE图谱中筛选出30个候选差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出9个差异表达的蛋白质,其中6个（INT6、TRA16、PP4C、CDK6、ANR16、ZN211）在Caski中高表达,3个（MYST1、LMNA、TIAF1）在Caski细胞中低表达。②Caski细胞中α、β–微管蛋白表达水平高于H8细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）。半定量分析α、β、γ–微管蛋白,在Caski细胞中的表达量高于H8细胞（P<0.05）。结论:①人宫颈鳞状上皮永生化细胞（H8）和宫颈癌细胞（Caski）核蛋白质组差异表达分析,筛选出TIAF1、TRA16、PP4C、CDK6、ANR16、ZN211 6个蛋白在Caski细胞核高表达,MYST1、INT6、LMNA 3个蛋白在Caski细胞核低表达。它们可能通过加速细胞周期、促进中心体成熟和细胞核分裂、信号转导、转录调控、抗凋亡等途径促进癌细胞的转化与增殖。这9个蛋白可能成为宫颈癌新的标记物或者治疗靶点,为宫颈癌及癌前病变的诊断提供帮助。②微管蛋白是真核细胞中普遍存在的结构,中心体异常和染色体不稳定是肿瘤细胞的普遍特征,中心体微管蛋白较其他功能微管蛋白随细胞周期变化活跃。目前尚无提纯中心体的成熟技术,我们通过免疫组化和免疫印迹用α、β、γ-微管蛋白的表达来推测中心体的表达情况,探讨中心体蛋白水平异常在宫颈癌发生发展中的意义,结果显示Caski细胞的α、β、γ-微管蛋白的表达量显著高于H8细胞,即癌细胞的中心体数目多、PCM过多聚集,具有更强的微管成核能力,中心体异常更为显著,以中心体微管蛋白为治疗靶点的研究有着可期待的前景。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 宫颈鳞状上皮永生化细胞和癌细胞的核蛋白质组比较分析
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 宫颈鳞状上皮永生化细胞和癌细胞的α、β、γ–微管蛋白比较分析
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 综述文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录