AQP9在非酒精性脂肪肝中作用机制的研究

论文摘要

目的:探讨在油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型中AQP9（Aquaproin-9）的表达和意义以及p38 MAPK（p38 mitogen-activted protein kinase）信号传导通路对AQP9表达的调节作用及意义,进一步探讨AQP9在非酒精性脂肪肝中的作用及可能的调节机制。方法:正常成人L-02肝细胞株,用含10%小牛血清的1640培养基传代培养。采用免疫细胞化学方法观察正常肝细胞株L-02中AQP9的表达部位。采用MTT法摸索建立模型所需的最适宜的油酸浓度,并用该浓度的油酸诱导正常肝细胞株L-02建立肝细胞脂肪变模型。另外在模型组中加入p38 MAPK的阻断剂SB203580。分为正常对照组（C组）,模型组（M组）,和阻断剂组（B组）。当油酸作用肝细胞24h、48h、72h后采用油红O染色观察细胞内的脂滴的积聚情况。并检测各组细胞内TG、FFA、甘油含量。RT-PCR法检测各组细胞内AQP9 mRNA的表达变化。Western blot法检测各组细胞内AQP9,总p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK蛋白的表达变化。结果:成功建立了油酸诱导的L-02肝细胞株脂肪变性的模型。油红O染色光学显微镜观察对照组细胞内未见肝细胞脂肪变,细胞排列紧密,边缘清晰,细胞核清晰可见。模型组在培养24h后可见少量脂肪变细胞, 72h细胞内聚集的脂滴数量最多,部分融合成较大的脂滴,脂肪变性程度最重。免疫细胞化学的结果显示AQP9的阳性产物在正常肝细胞株L-02中表达比较丰富,主要位于肝细胞的细胞膜上,而细胞浆和细胞核中无表达。M组和B组TG、FFA、甘油含量在各时相点较C组明显增高（p<0.01）。其中M组增高最为显著,与B组比较,差异有统计学意义（p<0.05）。M组AQP9 mRNA和蛋白的表达均一致上调,与C组相比有显著差异（p<0.01）,B组AQP9 mRNA和蛋白较C组表达上调,但上调幅度低于M组,差异有统计学意义（p<0.05）。M组和B组p38 MAPK总蛋白较C组,差异均无统计学意义（p>0.05）,M组磷酸化p38 MAPK蛋白较C组表达上调,差异有统计学意义（p<0.01）,B组中磷酸化P38 MAPK蛋白较C组无明显变化（p>0.05）,但表达显著低于M组,差异有统计学意义（p<0.01）。结论:采用油酸诱导L-02肝细胞株能够成功制作培养的肝细胞脂肪变模型。在肝细胞脂肪变模型中AQP9随肝细胞脂肪变性程度加重表达逐渐增加,阻断p38 MAPK信号传导通路后,AQP9的表达较模型组降低,肝脂肪变性程度降低,由此可见AQP9可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成,且p38 MAPK信号传导途径对在肝细胞脂肪变性模型中AQP9的表达有调节作用。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：AQP9 在培养肝细胞脂肪变性模型中的表达和意义以及p38 MAPK 信号传导通路对非酒精性脂肪肝中AQP9 表达的调节作用
• 前言
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 图片
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间撰写、发表的学术论文