肝细胞肝癌中STAT3和c-myc作用的初步研究

论文摘要

目的（1）检测STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝癌SMMC-7721细胞以及肝细胞肝癌组织中的表达。（2）抗体干预后观察STAT3及c-myc对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响以及两者的相互关系,探讨两者在肝癌发生发展中的作用。方法（1）免疫细胞化学及RT-PCR方法观察STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中的表达。（2）免疫组织化学方法检测STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达。（3）分别单独应用STAT3及c-myc的抗体及两种抗体联合应用后,MTT法检测肝癌细胞SMMC-7721的增殖情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR技术检测STAT3及c-myc mRNA表达的变化。结果（1）STAT3及c-myc在肝癌细胞SMMC-7721中均有表达。STAT3蛋白和c-myc蛋白均主要表达于细胞浆。（2）应用抗STAT3抗体干预后检测到肝癌细胞SMMC-7721增殖受到抑制,呈现时间、剂量依赖性。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组与10μ/mL处理组比较,抑制率具有显著差异（P＜0.05）。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组比较,抑制率无显著差异（P＞0.05）。（3）应用抗c-myc抗体干预后SMMC-7721细胞增殖受到抑制,细胞活力下降,呈现时间、剂量依赖性,20μg/mL处理组和40μg/mL处理组与10μg/mL处理组比较,抑制率具有显著差异（P＜0.01）。20μg/mL处理组和40μg/mL处理组比较,抑制率无统计学差异（P＞0.05）。（4）联合应用抗STAT3及抗c-myc抗体干预后,MTT结果显示对细胞增殖的抑制作用呈时间、剂量依赖性。在24h处理组和48h处理组,联合应用抗体对SMMC-7721细胞增殖的抑制率高于单用一种抗体处理组,具有统计学差异（P＜0.05）。72h处理组与单用一种抗体处理组相比,抑制率无统计学意义（JD＞0.05）。（5）流式细胞术检测显示单独应用抗STAT3和抗c-myc抗体及两者联合应用后,细胞的早期凋亡率从对照的0.88%增加到7.12%、10.6%和15.5%,晚期凋亡细胞比率从对照的1.00%增加到3.12%、5.32%和7.14%,联合应用抗STAT3及抗c-myc抗体处理的细胞凋亡率高于单用一种抗体处理组。（6）RT-PCR检测显示应用抗STAT3抗体作用于细胞48h,c-myc mRNA的表达下降;联合应用两种抗体处理细胞48h,c-myc mRNA的表达明显降低,（7）联合应用抗体作用于细胞48h,RT-PCR检测显示STAT3 mRNA的表达较对照组降低。（8）STAT3在33例肝细胞肝癌组织中表达,c-myc在32例肝细胞肝癌组织中表达,不同分化程度的肝细胞肝癌中STAT3,c-myc的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论（1）肝癌细胞SMMC-7721中存在STAT3及c-myc信号的过度激活。（2）抑制STAT3基因或者c-myc基因以及同时抑制STAT3和c-myc基因可以抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡。提示STAT3基因和c-myc基因在肝癌的发生发展中发挥了重要作用。（3）STAT3和c-myc基因在人肝细胞肝癌组织中过表达,STAT3,c-myc的表达强度与肝细胞肝癌的病理分级呈正相关,提示STAT3和c-myc基因参与了肝癌的恶性转化。（4）抗STAT3抗体作用于肝癌SMMC-7721细胞,可以抑制c-myc基因的表达,提示STAT3可能通过上调c-myc而抑制肝癌细胞凋亡,促进细胞增殖。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢
• 附录