罗丹明B标记几种真菌多糖的研究

论文摘要

本实验以树舌、云芝、黑木耳、银耳、榆耳、虫草、小刺猴头菌多糖为材料，利用真菌多糖还原性末端可以与活泼氨基发生偶联反应的特性，以罗丹明B为荧光染料对几种真菌多糖进行标记。实验研究的阶段性成果如下：（1）以罗丹明B为荧光染料对几种真菌多糖进行标记，得到荧光标记的几种真菌多糖，其中树舌粗多糖的标记效果较好。（2）通过比较几种真菌多糖与罗丹明B的结合效果，最后选择对树舌多糖的荧光标记进行进一步研究。（3）以罗丹明B为荧光染料对树舌多糖进行标记，并对其进行单因素实验，考察了反应时间、反应pH、反应温度三个因素对罗丹明B标记树舌多糖效果的影响。（4）以单因素实验的结果为基础，采用响应面法对影响标记效果的三个反应因素进行优化。最后通过Design-Expert8.05b软件分析，得出了罗丹明B标记树舌多糖的最优条件为：反应时间23.10h、反应温度25.83℃、反应pH5.23，预测标记后样品在λ552nm处的最大OD值为0.135。（5）通过MTT比色法，考察了荧光标记前后的树舌多糖对SWWC1116细胞抑制率的影响。结果表明荧光标记对树舌多糖抑制SWWC1116的效果几乎没有影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 荧光标记
• 1.1.1 荧光的产生
• 1.1.2 荧光探针
• 1.2 常用荧光染料
• 1.2.1 常用来标记蛋白的荧光染料
• 1.2.2 常用于核酸分析用荧光染料
• 1.3 荧光标记研究进展
• 1.3.1 蛋白质荧光标记的研究
• 1.3.2 核酸荧光标记的研究
• 1.3.3 多糖类荧光标记的研究
• 1.4 常见的多糖荧光标记方法
• 1.4.1 EDC/NHS 偶联法对糖醛酸的标记
• 1.4.2 对还原性末端的荧光标记
• 1.4.3 对羟基的标记
• 1.5 荧光标记真菌多糖的意义
• 1.6 实验目的与意义
• 1.7 展望
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验仪器
• 2.1.1 糖含量测定
• 2.1.2 荧光多糖制备
• 2.1.3 体外抑瘤实验
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 糖含量测定
• 2.2.2 荧光多糖制备
• 2.2.3 体外抑瘤实验
• 2.3 实验试剂
• 2.3.1 糖含量测定
• 2.3.2 荧光多糖制备
• 2.3.3 体外抑瘤实验
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 七种真菌多糖总糖、还原糖、以及蛋白含量的测定
• 2.4.2 七种荧光多糖的制备
• 2.4.3 罗丹明 B 标记树舌多糖条件的优化
• 2.4.4 体外抑瘤实验
• 第三章 结果与分析
• 3.1 七种真菌多糖总糖、还原糖、以及蛋白含量的测定
• 3.1.1 七种真菌多糖总糖、还原糖、以及蛋白的标准曲线
• 3.1.2 七种真菌多糖总糖、还原糖、多糖以及蛋白的含量
• 3.2 七种荧光多糖的制备
• 3.2.1 罗丹明 B 标记七种真菌多糖的效果
• 3.2.2 罗丹明 B 标记树舌多糖单因的素考察
• 3.3 响应面法对罗丹明 B 标记树舌多糖反应条件优化的结果
• 3.3.1 Box-Benhnken 中心组合试验设计的结果
• 3.3.2 模型的二次多项回归方程与试验结果的显著性分析
• 3.3.3 模型验证试验
• 3.4 MTT 法检测标记后的树舌水多糖对细胞的抑制作用
• 第四章 讨论
• 4.1 七种真菌多糖的总糖、还原糖以及蛋白含量的测定
• 4.2 七种荧光多糖的制备
• 4.2.1 罗丹明 B 标记树舌多糖单因的素考察
• 4.3 响应面法对罗丹明 B 标记树舌多糖反应条件优化的结果
• 4.4 MTT 法检测标记后的树舌多糖对细胞的抑制作用
• 第五章 结论
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢