猪瘟病毒梧州毒株单克隆抗体的制备与初步鉴定研究

论文摘要

本研究应用PK-15细胞分离培养猪瘟病毒（CSFV）梧州毒株（GXWZ02）经提纯作为抗原免疫小鼠建立分泌抗CSFV的McAb杂交瘤细胞株。该毒株经5代传代后能较好地适应传代细胞的生长,经测定其细胞毒的TCID50为106/ml。用提纯细胞毒作为抗原免疫小鼠,经3次免疫后效果显著,免疫的BALB/C小鼠血清猪瘟抗体效价达到1:32000。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞常规方法融合,先后进行了两次融合,共有660融合孔,经间接ELISA筛选,融合的阳性孔共有468孔,选145个阳性融合孔进行有限稀释法克隆3次,获得了19株分泌抗CSFV的单克隆抗体McAb的杂交瘤细胞株,在-80℃超低温下保存3个月后复苏的各杂交瘤细胞仍然能稳定分泌抗CSFV的McAb。从中选取10株杂交瘤细胞制备腹水,间接ELISA试验检测选取的10株腹水单抗效价1:400-1:6400,效价最高的是1B3、2C6都达到1:6400,其次是2B5、2A6、1F4、1F8、1B7效价都达到:1:3200,1C7、2B3效价为1:800,最低的是1A9效价只达到1:200。免疫荧光试验（IFA）对McAb的特异性检测结果表明,这些单抗从1:50-1:400稀释后与接种GXWZ02毒的细胞能产生特异荧光反应,各单抗的稀释度:2C6为1:400,1F4、1F8、2A6、2B5、1B3、1B7为1:200,1C7、2B3为1:100,1A9为1:50。ELISA和IF鉴定试验确定为抗GXWZ02的单抗,这

论文目录

• 前言
• 一 猪瘟的国际流行态势与我国流行特点
• 1 国际流行态势
• 2 我国流行特点
• 二 CSFV的病原学特性及研究进展
• 1 CSFV病原学特性
• 2 猪瘟病毒的基因组
• 3 CSFV的抗原性、毒力和基因分型
• 三 猪瘟实验室诊断方法
• 四 猪瘟McAb制备与应用研究进展
• 1 研究CSFV抗原结构蛋白间关系
• 2 研究CSFV抗原变异
• 3 鉴定CSFV保护性抗原蛋白
• 4 研究CSFV蛋白质抗原表位
• 5 研究CSFV E0蛋白RNA酶活性
• 6 在CSFV鉴别诊断方面的应用
• 五 猪瘟的防制策略
• 六 研究目的与意义
• 实验研究内容
• 一 材料
• 1 病毒与细胞
• 2 实验所用引物
• 3 实验动物
• 4 主要试剂
• 5 主要仪器
• 6 主要试剂的配制
• 二 方法
• 1 抗原的制备
• 2 免疫动物
• 3 筛选方法的建立
• 4 杂交瘤细胞株的建立
• 5 杂交瘤细胞株的冻存与复苏
• 6 单抗腹水的生产
• 7 McAb的鉴定
• 8 杂交瘤细胞株的稳定性测定
• 三 结果
• 1 抗原的制备
• 2 免疫小鼠血清效价的测定结果
• 3 筛选方法的建立
• 4 杂交瘤细胞株的建立
• 5 McAb的鉴定
• 6 杂交瘤细胞株的稳定性测定
• 四 讨论
• 五 结论
• 参考文献
• 致谢