半滑舌鳎野生群体和养殖群体遗传多样性的研究

论文摘要

半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Günther）为我国名贵海水经济鱼类,主要分布于我国渤海、黄海、东海、南海北部,朝鲜、日本及俄罗斯的亚洲海区。近年来由于过度捕捞、环境污染等原因,半滑舌鳎野生资源日益衰竭,目前除黄渤海外其他海区己基本未见渔获。半滑舌鳎养殖业随着人工育苗繁殖技术的成熟迅速地发展起来,南北地区都开始半滑舌鳎的养殖,但是由于人工繁殖过程中如:遗传瓶颈、近交衰退及其他因素势必对半滑舌鳎群体遗传结构产生不良影响。本研究采用了等位酶和AFLP（扩增片断长度多态性）技术对4个野生及养殖的半滑舌鳎群体（河北唐山野生群体、江苏连云港野生群体、山东海阳养殖群体、福建漳州养殖群体）的遗传多样性进行了比较分析,以期为半滑舌鳎的种质资源的保护、遗传育种提供理论依据。主要结果:1.采用垂直板型不连续聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳对野生与养殖半滑舌鳎群体（4个群体,各30尾）9个酶16个位点进行了检测分析。以P0.99为标准,唐山野生群体在4个位点（Sod-1、Adh-1、Sdh-1、Amy-2）上表现为多态,其它三个群体（江苏连云港野生、福建漳州养殖、山东海阳养殖）在3个位点（Adh-1、Sdh-1、Amy-2）上表现为多态。两个野生群体的多态位点百分比（P）、观察杂合度（HO）、期望杂合度（He）、平均有效等位基因数（Ae）平均值分别为21.275%,0.1177,0.0854,1.1499,均高于两个养殖群体的平均值（18.75%,0.1156,0.0741,1.1355）。唐山野生群体与江苏连云港野生群体间遗传距离为0.0006,4个群体的平均遗传距离为:0.0012。群体间分化较低（FST=0.0109 ,Nm=22.5850）。结果表明:与其他鱼类相比半滑舌鳎群体遗传多样性处于中等水平。半滑舌鳎养殖群体遗传多样性水平低于野生群体,渤海与黄海野生群体间遗传分化较低。2.采用8个AFLP引物组合,在4个群体的120个个体中共扩增出498个位点,其中多态位点为279个,多态位点比例百分比为56.02 %。野生群体的多态位点百分比、Nei遗传多样性指数和Shannon遗传多样性指数均高于养殖群体:45.18 %、0.1159、0.1817（唐山野生群体）;39.96 %、0.1059、0.1663（江苏连云港野生群体）;37.95 %、0.1046、0.1629（山东海阳养殖群体）;37.75 %、0.1015、0.1587（福建漳州养殖群体）。野生群体间平均遗传距离为0.0665,GST为0.2052,基因流为1.9371。结果表明:与其他鱼类相比半滑舌鳎群体遗传多样性处于中等偏下水平。养殖群体的遗传变异水平低于野生群体,野生群体间有较大的基因交流,显性基因频率分布表明半滑舌鳎野生群体与养殖群体的遗传结构相近。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 遗传多样性研究
• 1.1.1 遗传多样性研究的意义
• 1.1.2 遗传多样性研究的方法
• 1.1.3 遗传多样性保护与保存方法
• 1.2 半滑舌鳎研究
• 1.2.1 半滑舌鳎生物学特点
• 1.2.1.1 半滑舌鳎形态学特征
• 1.2.1.2 半滑舌鳎生态及繁殖习性
• 1.2.2 半滑舌鳎研究现状
• 1.3 遗传标记在海水硬骨鱼遗传多样性研究中的应用
• 1.3.1 形态学标记
• 1.3.2 染色体标记
• 1.3.3 蛋白质标记
• 1.3.4 分子标记
• 1.3.4.1 RFLP 标记
• 1.3.4.2 线粒体DNA（mtDNA）标记
• 1.3.4.3 RAPD 标记
• 1.3.4.4 AFLP 标记
• 1.3.4.5 微卫星标记（SSR）
• 1.3.4.6 其他分子标记
• 1.3.5 存在问题与展望
• 第二章 半滑舌鳎野生与养殖群体遗传多样性的等位酶研究
• 2.1 实验材料、仪器与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 样品处理
• 2.1.3 实验电泳方法
• 2.1.4 实验仪器
• 2.1.5 主要试剂
• 2.1.6 等位酶数据统计
• 2.2 结果
• 2.2.1 半滑舌鳎群体等位酶表达
• 2.2.1.1 超氧化物歧化酶
• 2.2.1.2 天冬氨酸转氨酶
• 2.2.1.3 乙醇脱氢酶
• 2.2.1.4 山梨醇脱氢酶
• 2.2.1.5 苹果酸酶
• 2.2.1.6 苹果酸脱氢酶
• 2.2.1.7 乳酸脱氢酶
• 2.2.1.8 酯酶
• 2.2.1.9 淀粉酶
• 2.2.2 半滑舌鳎群体的遗传多样性
• 2.2.2.1 半滑舌鳎群体的等位基因频率
• 2.2.2.2 半滑舌鳎群体的遗传多样性
• 2.2.2.3 半滑舌鳎4 个群体的观察杂合度、期望杂合度、固定指数和H-W 平稳结果比较
• 2.2.3 半滑舌鳎群体的遗传分化
• 2.3 讨论
• 2.3.1 半滑舌鳎群体的遗传多样性
• 2.3.2 半滑舌鳎群体间的遗传分化
• 第三章 半滑舌鳎野生与养殖群体遗传多样性的AFLP 分析
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 半滑舌鳎基因组DNA 的提取及检测
• 3.1.2.1 DNA 的提取
• 3.1.2.2 DNA 质量检测及浓度的测定
• 3.1.3 AFLP 实验方法
• 3.1.3.1 AFLP 技术的基本流程
• 3.1.3.2 酶切
• 3.1.3.3 连接
• 3.1.3.4 预扩增
• 3.1.3.5 选择性扩增
• 3.1.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.1.5 实验仪器
• 3.1.6 实验药品
• 3.1.7 实验结果数据分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 AFLP 的扩增结果
• 3.2.2 半滑舌鳎4 个群体的遗传多样性
• 3.2.3 显性基因型频率的分布
• 3.2.4 半滑舌鳎4 个群体内及群体间的遗传分化
• 3.3 讨论
• 3.3.1 半滑舌鳎野生群体遗传多样性水平
• 3.3.2 半滑舌鳎野生群体与养殖群体遗传多样性水平的比较
• 3.3.3 半滑舌鳎群体的遗传分化
• 第四章 结论与展望
• 致谢
• 参考文献
• 在学期间发表的学术论文