论文摘要
组织蛋白酶B（cathepsin B，CB）是细胞溶酶体中的一种半胱氨酸蛋白酶，参与蛋白质降解，骨重建及抗原提呈等生理过程。有研究表明，CB的异常表达和定位可引起机体的病理反应，在多种肿瘤组织中CB的表达及活性明显高于邻近正常组织。肿瘤细胞CB表达及活性增强有助于肿瘤降解细胞外基质主要成分一层粘连蛋白和Ⅳ型胶原，使肿瘤易侵袭及扩散，并且还可以激活能够降解细胞外基质的尿激酶型纤溶蛋白酶原激活剂、基质金属蛋白酶等。基质金属蛋白酶（matrix metallproteinases，MMPs）是锌离子依赖性蛋白水解酶，在生理情况下可降解细胞外基质及基底膜的一类内肽酶。其中MMP-9是基质金属蛋白酶中的一种，又称Ⅳ型胶原酶或明胶酶B，是MMPs家族中分子量最大的酶，现有研究结果显示MMP-9具有降解细胞外基质、参与肿瘤的新生血管形成及调节细胞粘附等作用，从而在肿瘤细胞的浸润和转移灶的形成过程中起着重要作用。已有研究证明在胃癌、乳癌、甲状腺癌及肺癌等多种恶性肿瘤中，MMP-9呈现过表达，且和肿瘤的浸润转移密切相关。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率较高，且趋向年轻化，转移和复发率较高，预后差。浸润和转移是宫颈癌患者晚期主要死亡原因之一。宫颈癌的发生、发展和浸润转移是多因素、多阶段、多基因参与的过程，因此，发现与肿瘤浸润转移相关的指标已成为研究热点之一。有关CB和MMP-9在宫颈鳞癌中的表达及浸润转移关系的相关性研究，至今国内外尚未见文献报道，为进一步探讨CB和MMP-9蛋白的表达与宫颈癌浸润转移的关系，寻找早期检测宫颈癌发生、发展和浸润转移的指标及抑制宫颈癌浸润转移的有效方法，本研究采用免疫组化SP法，分别观察了45例宫颈鳞癌组织、63例宫颈上皮内瘤样变组织及33例正常宫颈上皮组织中CB、MMP-9蛋白的表达情况，并探讨它们之间的相互关系及作用机制，该研究为进一步阐明宫颈癌浸润转移机制及对宫颈癌的临床治疗提供了理论基础。材料与方法1．所选45例宫颈鳞癌组织、63例宫颈上皮内瘤样变组织和33例正常宫颈上皮组织为郑州大学第三附属医院2004年5月至2006年10月间手术切除标本。2．采用免疫组织化学SP法分别检测45例宫颈鳞癌、63例宫颈上皮内瘤样变及33例正常宫颈上皮组织中CB和MMP-9蛋白的表达水平。分析二者在宫颈鳞癌不同分化程度、不同浸润程度及有无淋巴结转移的癌组织中表达的差异及其相关性。3．统计学方法：应用SPSS10.0统计学软件进行统计学处理。计数资料采用χ2检验（chi-square）、两变量之间的关系分析采用Spearman相关分析，以α=0.05为显著性检验水准。结果1．免疫组化结果显示，正常宫颈上皮组织中CB蛋白阳性表达率为0％（0／33），宫颈上皮内瘤样变组织中CB蛋白阳性表达率为30.15％（19／63），宫颈癌组织中CB蛋白阳性表达率为55.56％（25／45）；癌组织CB蛋白阳性表达率与宫颈上皮内瘤样变组织及正常宫颈上皮组织两两相比，差异均有统计学意义（P＜0.01），且其阳性表达率随宫颈鳞癌分化程度的降低而升高，差异有显著性（P＜0.05）。2．免疫组化结果显示，正常宫颈上皮组织中MMP-9蛋白阳性表达率为6％（2／33），宫颈上皮内瘤样变组织中MMP-9蛋白阳性表达率为41.27％（26／63），宫颈癌组织中MMP-9蛋白阳性表达率为71.11％（32／45）；癌组织MMP-9蛋白阳性表达率与宫颈上皮内瘤样变组织及正常宫颈上皮组织两两相比，差异均有统计学意义（P＜0.01），且其阳性表达率随宫颈鳞癌分化程度的降低而升高，差异有显著性（P＜0.05）。3．随着浸润深度的增加，CB和MMP-9蛋白阳性表达率都明显升高，CB在癌组织浸润深度上的阳性表达率从未达1／2宫颈到突破1／2宫颈依次为：33.33％（6／18）、70.37％（19／27），两组比较有明显差异（P＜0.05）；MMP-9依次为：50.00％（9／18）、85.18％（23／27），两组比较有明显差异（P＜0.05）。4．随着癌细胞淋巴结的转移，CB和MMP-9蛋白阳性表达率都明显升高，CB在有淋巴结转移的癌组织中阳性表达率为90％（18／20），明显高于无淋巴结转移组的28％（7／25），差异有显著性（P＜0.01）；MMP-9在有淋巴结转移组为95.00％（19／20），明显高于无转移组的52％（13／25），差异有显著性（P＜0.01）。5．CB蛋白和MMP-9蛋白在宫颈鳞癌中的表达相关性经统计学分析显示，两者之间呈正相关（P＜0.01）。结论1．CB蛋白的阳性表达率在宫颈鳞癌组织中表达较高，并随着分化程度的降低而升高，随着淋巴结的转移和浸润深度的增加而升高，表明CB参与宫颈鳞癌的发生发展及浸润转移过程。2．MMP-9蛋白的阳性表达率从正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样变组织至癌组织逐渐升高，随着癌组织分化程度的降低而升高，随着癌组织浸润深度的增加和淋巴结的转移而升高，提示MMP-9蛋白的表达可能促进了宫颈鳞癌的发生、发展和浸润转移。3．CB和MMP-9蛋白在宫颈鳞癌中的表达，呈正相关关系，表明二者可能在宫颈鳞癌的发生发展及浸润转移过程中起协同作用。