内皮素-1对体外培养的兔关节软骨细胞NO和MMP-1表达的影响

论文摘要

目的：骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是中老年人最常见的疾病之一，它以关节软骨退变、增生性关节改变和滑膜炎症为特征。其发病机理尚未完全阐明，目前认为多种细胞因子及炎性介质造成软骨基质的合成及分解代谢失衡在OA的发病中有着重要的意义，本试验通过对ET-1作用于体外培养的兔软骨细胞的研究，观测ET-1对软骨细胞生成NO及MMP-1的影响，探讨ET-1在骨关节炎发病机理中的作用。方法：首先进行2月龄兔原代软骨细胞的培养、传代及鉴定，然后将ET-1共育于兔关节软骨细胞，硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的含量，双抗夹心ELISA法测定细胞上清液中MMP-1含量，再对测定的NO和MMP-1的浓度与ET-1的浓度及作用时间进行有关的统计学分析。结果：在软骨细胞加入不同剂量的ET-1后共育24小时后发现NO及MMP-1含量升高，并且ET-1呈剂量依赖性的诱导软骨细胞合成NO及MMP-1升高，有统计学意义。同时在软骨细胞中加入25ngET-1后在不同时间点检测发现NO及MMP-1含量较空白组升高，但12小时与24小时之间无明显变化，24小时后呈时间依赖性升高，具有统计学意义。结论：1．ET-1可以促进体外培养的兔软骨细胞分泌NO和MMP-1。2．ET-1可以通过促进软骨细胞分泌NO和MMP-1参与了软骨损伤过程，拮抗ET-1的作用可能成为治疗OA的新途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一章 对象与方法
• 1.1 兔原代关节软骨细胞分离、培养、传代和鉴定
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 试验方法
• 1.2 ET-1与兔关节软骨细胞的分组共育及提取上清液
• 1.2.1 实验材料
• 1.2.2 实验分组
• 1.2.3 实验种板
• 1.2.4 细胞上清液的提取及保存
• 1.3 NO及MMP-1的测定
• 1.3.1 NO的检测
• 1.3.2 MMP-1测定
• 第二章 统计分析
• 2.1 统计学处理
• 2.2 实验结果
• 2.3 NO各组间的比较
• 2.3.1 时间依赖性板各组间比较的P值
• 2.3.2 NO对ET-1时间依赖性曲线
• 2.3.3 剂量依赖性板各组间比较的P值
• 2.3.4 NO对ET-1计量依赖性曲线
• 2.3.5 NO各组间比较的统计说明
• 2.4 MMP-1各组间的比较
• 2.4.1 时间依赖性板各组间比较的P值
• 2.4.2 MMP-1对ET-1时间依赖性曲线
• 2.4.3 计量依赖性板的各组间比较的P值
• 2.4.4 MMP-1对ET-1计量依赖性曲线
• 2.4.5 MMP-1各组间比较的统计说明
• 第三章 实验结果
• 3.1.倒置相差显微镜观察
• 3.2.培养细胞II型胶原免疫组化检测
• 3.3.ET-1对软骨细胞生成NO及MMP-1的影响
• 第四章 讨论
• 4.1 NO及MMP-1与软骨损伤和OA发病的关系
• 4.2 ET-1作用于软骨细胞对生成NO及MMP-1的影响
• 4.3 ET-1与OA发病的关系
• 第五章 结论
• 第六章 附图
• 第七章 参考文献
• 第八章 综述
• 第九章 致谢
• 第十章 攻读学位期间主要的科研成果目录