论文摘要
目的:构建微血管构筑二维表型表达技术平台,探讨微血管构筑立体表型异质性对MSCT肺灌注结果的影响,明确MSCT肺灌注成像能否评价NSCLC与炎性肿块血流模式的差异以及NSCLC恶性程度的差异,为科学地解释MSCT肺灌注成像差异产生原因寻求理论依据。方法:收集2005年12月至2008年1月就诊于我院胸外科肺内单发结节患者65例行MSCT灌注成像,其中34例按活体肺内解剖方位选取与MSCT灌注成像最大层面相当的病理层面,采用免疫组化、特殊染色、电镜观察等技术构建微血管构筑二维表型,检测指标包括微血管的形态学、微血管基底膜完整性、微血管密度（MVD）、微血管不同表型与微淋巴管、微血管成熟度与管腔化程度、微血管免疫遗传学特性。34例患者中21例获取完整的肺内结节标本,每个结节各取5层组织层面石蜡包埋（包括与MSCT灌注成像最大层面对应的病理层面）,检测每一层石蜡包埋标本的微血管构筑二维表型,用变异系数与异质率来定量评价微血管构筑立体表型异质性的大小,用多元相关来探讨纳入病例临床病理特征、微血管构筑表型与NSCLC MSCT形态学表现及灌注成像差异的关系,同时研究微血管构筑立体表型异质性对探讨MSCT肺灌注成像机制的影响。结果:（1）成功构建微血管构筑二维表型表达技术平台:周围区、中心区MVD及总MVD均较交界区MVD明显增高（p＜0.05）,周围区MVD高于中心区MVD,但差异无显著性;随结节体积增大,不同区域MVD数据分布异质性增高;周围区未形成完整管腔的MVD明显多于中心区（p＜0.05）;ephrinB2及EphB4在瘤细胞中的表达具有一致性,在间质血管中的表达具有差异性。（2）肺癌微血管构筑二维表型与肺癌临床病理特征的多元相关性分析显示:不同管腔成熟度周围区CD34-MVD与分化程度和淋巴结转移正相关（p＜0.05）;与P-TNM分期及肿瘤组织学类型无明显关系（p＞0.05）;与VEGF表达强度、ephrinB2及EphB4表达强度和PCNA阳性率正相关（p＜0.05）,分化程度与PCNA阳性率、淋巴结转移、VEGF表达强度正相关（p＜0.05）;与基底膜完整性负相关（p＜0.05）;淋巴结转移与PTNM分期、分化程度、PCNA阳性率与ephrinB2及EphB4表达强度正相关（p＜0.05）。（3）微血管构筑立体表型异质性检测:所有检测的组织标本中,2D-TMAP与3D-TMAP均呈现程度不同的异质性,正常组织和非活动性炎性病变的异质性明显小于恶性病变。NSCLC CD34-MVD变异系数分布于16.7%～28.3%之间,总的变异系数23%,PCNA的变异系数分布于4.07%～8.33%之间,总的变异系数6.45%,CD34-MVD和PCNA的变异系数与分化程度均呈正相关,相关系数分别为0.668、0.535,p值为0.003、0.020;ephrinB2、EphB4、VEGF总的异质率分别为38.5%、33%、40%,腺癌（42%）具有较高的异质率,其次为腺鳞癌（28%）,癌前病变与鳞癌的异质率最低（16%～20%）。（4）MSCT形态学表现与肺癌临床病理特征和微血管构筑二维表型的多元相关性分析显示:分化程度与空泡征正相关（p＜0.05）;PTNM分期与淋巴结转移显著正相关（p＜0.01）,与毛刺征正相关（p＜0.05）;结节大小与衰减密度显著负相关（p＜0.01）;周围区管腔不完整的MVD与深分叶、空泡征、血管集束征、淋巴结转移正相关（p＜0.05）。（5）MSCT灌注参数与肺癌临床病理特征、微血管构筑二维表型及微血管构筑立体表型异质性的多元相关性分析显示:分化程度与周围区BF显著负相关（p＜0.01）;与总BF、总BV、总PEI均成负相关（p＜0.05）;管腔不成熟的周围区CD34-MVD与周围区BF负相关（p＜0.05）,与总BF、总BV、总PEI均成负相关（p＜0.05）;PCNA与周围区BF显著负相关（p＜0.01）;与总BF、总BV、总PEI均成负相关（p＜0.05）;变异系数与周围区BF显著负相关（p＜0.01）与总BF、总M/A均成负相关（p＜0.05）。（6）微血管构筑立体表型异质性在探讨MSCT肺灌注成像机制中的影响:在纳入的22个恶性结节中每个结节随机抽取5个受检蜡块,按常规方法测定受检蜡块MVD值与VEGF的表达强度,共获取5组数据,采用线性相关分析的方法,分析每组MVD值与VEGF的表达强度与MSCT灌注成像各参数相关性。结果显示:2组显示恶性结节的BF、PEI、M/A与MVD呈正相关（p均＜0.05）,3组显示无相关（p均＞0.05）。结论:（1）MSCT灌注成像能有效地鉴别肺内占位性病变的性质与NSCLC分化程度,其机制在于通过检测成熟的功能性管腔化血管的密度差异,评价肺内占位性病变的血流模式;（2）在没有发生中心坏死之前,按常规方法测定的灌注参数对结节的整体评价较好,而要确切评价结节与肿瘤分化程度的相关性,首选周围区BF值;（3）在探讨MSCT肺灌注成像机制时,如果不有效控制微血管构筑表型异质性的影响,保证所选取的病理标本取材部分与兴趣区完全一致,将会得到不可靠的结论;（4）通过PEI无法确切鉴别活动性炎性结节与恶性结节;MSCT形态学分析指标中,空泡征、短毛刺、非实性结节、胸膜凹陷征、支气管征及血管聚集征在恶性结节的诊断中意义较大;（5）NSCLC微血管构筑表型对血管新生与肿瘤增殖的调控是一种网状结构,以往对于肿瘤研究中试图通过单一因素来回答复杂的生物学基本问题的观念有待更新;（6）NSCLC的生物学行为至少具有两个明显不同的阶段,3cm很有可能就是生物学特性发生转变的重要分界值,将不同阶段的病变纳入一组进行统计分析,是不合理与不科学的。
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