论文题目: 低氧诱导因子1诱导血红素加氧酶1过表达在大鼠肾移植缺血再灌注损伤中的保护性作用研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 陈波
导师: 张元芳,王翔,瞿连喜
关键词: 肾微血管内皮细胞,低温缺氧再复氧损伤,低氧诱导因子,血红素加氧酶,抗凋亡,免疫保护,大鼠肾移植,缺血再灌注损伤
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 随着更多特异性免疫抑制药物应用于临床,急性排斥反应发生率已经大大减低,但是移植物长期存活状况并无明显改善。非免疫因素因而更加受到人们重视,而缺血再灌注损伤(IRI)无疑是其中极为重要的一环。IRI后因急性肾小管坏死(ATN)往往导致移植肾功能延迟恢复,以后更会增加急性排斥和慢性移植物失功的发生率。低氧诱导因子 1(HIF-1)是重要的氧依赖性核转录因子,低氧条件下能上调多个靶基因表达以减少缺氧性损伤。靶基因之一的血红素加氧酶1(HO-1)被多个研究证实能够在心脏、肝脏和小肠移植中抑制IRI。本实验中我们设想通过预处理使HIF-1稳定表达并诱导内源性HO-1过表达,探讨它们在体内和体外试验中对缺血再灌注及缺氧再复氧损伤的保护作用及其机制。 第一部分 肾微血管内皮细胞的原代培养及低温缺氧再复氧损伤细胞模型的建立 目的: 在体外原代培养肾微血管内皮细胞;建立肾微血管内皮细胞低温缺氧再复氧损伤模型,在体外试验中模拟临床肾移植过程中的缺血再灌注损伤。 方法: 采用三步梯度筛网法获得肾血管球后以0.1%Ⅳ型胶原酶37℃消化分离获得肾微血管内皮细胞。四氮唑盐比色试验检测细胞活性,通过免疫组化法检测CD34抗原、间接免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原及流式细胞技术检测CD31抗原鉴定培养细胞。对数生长期细胞低温、缺氧、去血清条件下培养24h后置于正常条件培养6h以建立低温缺氧再复氧损伤细胞模型。 结果: 四氮唑盐比色试验检测细胞活性生长曲线近似倒“S”形。CD34抗原免疫组化阳性染色为细胞膜呈棕褐色,阳性率为97.2±1.7%。Ⅷ因子相关抗原间接荧光检测显示胞浆内呈亮绿色,证实为血管内皮细胞。流式细胞技术检测CD31抗原测得阳性细胞比例为96.3%±2.7%。肾微血管内皮细胞经低温缺氧再复氧处理后大部分细胞变圆收缩,细胞间隙明显增宽。 结论: 应用这种方法体外成功培养出纯度较高的肾微血管内皮细胞,传代后内皮细胞性状稳定;建立了细胞低温缺氧再复氧损伤模型。
论文目录:
中英文名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 肾微血管内皮细胞原代培养及低温缺氧再复氧细胞模型的建立
材料与方法
结果
讨论
参考文献
第二部分 HIF-1诱导HO-1过表达在RMVEC低温HR损伤中的保护性作用研究
第1节：RMVEC低温HR损伤中HIF-1α稳定表达诱导HO-1过表达
材料与方法
结果
讨论
第2节：HIF-1α诱导HO-1过表达在RMVEC低温HR损伤中的抗凋亡和免疫保护作用
材料与方法
结果
讨论
参考文献
第三部分 HIF-1α诱导HO-1过表达对大鼠肾移植缺血再灌注损伤的保护性作用研究
材料与方法
结果
讨论
参考文献
总结
综述
附录：在读期间发表文章和获奖情况
致谢
发布时间: 2005-09-19
参考文献
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- [2].低氧诱导因子和miR-21在肾脏晚期缺血预适应中作用机制的研究[D]. 徐夏莲.复旦大学2011
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