短葶山麦冬遗传多样性研究

论文摘要

短葶山麦冬（Liriope muscari （Decne.） Bailey）为百合科山麦冬属植物,是中国重要的传统中草药,主要分布在福建泉州和莆田,具有滋阴生津、润肺止咳、清心除烦功能等功效,常用于治疗肺燥干咳、虚劳咳嗽,心烦失眠、内热消渴、肠燥便秘等症状。目前我国关于短葶山麦冬植物分子生物方面的研究报道较少,尤其缺乏在DNA水平遗传多样性研究,限制了短葶山麦冬资源的开发和利用。本研究通过利用47份短葶山麦冬种质为研究材料,运用RAPD、ISSR、SRAP和TRAP四种分子标记对研究其遗传多样性,并结合形态学标记对短葶山麦冬植物遗传多样性进行评价。研究成果如下:1.调查短葶山麦冬12个主要数量性状的基础上,运用变异分析、相关分析和因子分析对各性状进行统计分析。结果表明:短葶山麦冬各单株性状间差异较大;地上部分性状与地下部分性状有极显著的相关性说明可以根据地上部分的生长发育状况,初步判定地下部分的生长状况,为品种的选择提供依据。短葶山麦冬居群内性状变异较大,各性状间存在较复杂的关系,在性状选择与育种时需要注意相互关系。2.以改进的CTAB法提取短葶山麦冬基因组DNA。建立短葶山麦冬RAPD、ISSR、SRAP和TRAP四种分子标记体系,研究47份短葶山麦冬材料的遗传多样性水平。1)从9条RAPD引物中筛选出5条引物对样品DNA进行分析,共检测出来49个位点,其中多态性位点32个,占65.31%。Shannon信息指数平均值为0.2070;Nei’s基因多样度平均值为0.1292;每个位点的有效等位基因数平均值为1.2105;观测等位基因数平均值为1.6531。UPGMA聚类表明遗传相似系数为0.4899-0.9999,莆田仙游的野生种质为一类,与地方品种间遗传差异大。2)从31条ISSR引物中筛选出18条引物对样品DNA进行分析,共检测出来131个位点,其中多态性位点83个,占63.4%。Shannon信息指数平均值为0.2178;Nei’s基因多样度平均值为0.1363;每个位点的有效等位基因数平均值为1.2166;观测等位基因数平均值为1.5968。UPGMA聚类表明遗传相似系数为0.6755-0.9839,莆田仙游的野生种质为一类,与地方品种间遗传差异大。3)从90对SRAP引物中筛选出15对引物对样品DNA进行分析,共检测出来323个位点,其中多态性位点286个,占88.47%。Shannon信息指数平均值为0.3190;Nei’s基因多样度平均值为0.1977;每个位点的有效等位基因数平均值为1.3079;观测等位基因数平均值为1.896。UPGMA聚类表明遗传相似系数为0.6634-0.9156,莆田仙游的野生种质为一类,与地方品种间遗传差异大。4)从160对TRAP引物中筛选出11对引物对样品DNA进行分析,共检测出来335个位点,其中多态性位点323个,占96.42%。Shannon信息指数平均值为0.3340;Nei’s基因多样度平均值为0.209;每个位点有效等位基因数平均值为1.332;观测等位基因数平均值为1.964。UPGMA聚类表明遗传相似系数为0.5244-0.9761。3.采用苯酚-硫酸法测定短葶山麦冬块根中多糖含量,最大吸收波长490 nm,葡萄糖浓度在7.433-51.80 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数0.9995。平均加样回收率102.29%,RSD=1.34%。换算因子f为1.22,通过公式多糖含量%=（C×D×f）/W×100%计算得到短葶山麦冬中多糖的含量。样品多糖平均含量为10.25%,其中28号样品多糖含量最高,为16.48%,14号样品最低为4.08%。

论文目录

• 论文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1 短葶山麦冬研究进展
• 1.1 本草考证
• 1.2 种源分布
• 1.3 植物特征
• 1.4 化学成分
• 1.5 药理作用
• 2 遗传多样性的研究方法和意义
• 2.1 遗传多样性概念
• 2.2 遗传多样性研究的意义
• 2.3 遗传多样性的检测方法
• 3 本研究的内容和意义
• 3.1 研究内容
• 3.2 研究意义
• 第二章 短葶山麦冬表型多样性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试验方法
• 1.3 分析指标
• 1.4 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 短葶山麦冬的表型变异分析
• 2.2 短葶山麦冬表型性状的相关性分析
• 2.3 因子分析
• 2.4 短葶山麦冬表型性状的聚类分析
• 2.5 短葶山麦冬单株产量
• 3 结论与讨论
• 第三章 短葶山麦冬遗传多样性分子标记研究
• 1 短葶山麦冬遗传多样性的RAPD 分析
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 短葶山麦冬RAPD 标记的结果与分析
• 2 短葶山麦冬遗传多样性的ISSR 分析
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 短葶山麦冬ISSR 标记的结果与分析
• 3 短葶山麦冬遗传多样性的SRAP 分析
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 短葶山麦冬SRAP 标记的结果与分析
• 4 短葶山麦冬遗传多样性的TRAP 分析
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 短葶山麦冬居群的TRAP 标记结果与分析
• 5 本章讨论
• 第四章 短葶山麦冬药用成分多糖的测定
• 1 材料
• 1.1 供试材料
• 1.2 主要试剂与配制
• 2 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 最大吸收波长的确立
• 3.2 标准曲线的绘制
• 3.3 精密度实验
• 3.4 稳定性试验
• 3.5 回收率试验
• 3.6 换算因子计算
• 3.7 多糖含量测定
• 4 讨论
• 第五章 全文小结
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文
• 奖励与荣誉