AQP-4在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的作用

论文摘要

目的检测水通道蛋白-4（aquaporin-4,AQP-4）在5h缺氧缺糖后星形胶质细胞水肿形成及消退整个过程中表达变化的规律,分析其与缺氧缺糖引起的星形胶质细胞水肿之间的关系,初步探讨AQP-4在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中所发挥的作用。方法1.星形胶质细胞的培养、鉴定及缺氧缺糖水肿模型的建立:提取纯化新生SD大鼠（新生2天内）大脑皮层星形胶质细胞,并用神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）进行细胞免疫荧光染色鉴定。将原代成熟的星形胶质细胞分为正常组和缺氧缺糖组,缺氧缺糖组细胞经过5h缺氧缺糖培养后恢复正常条件培养以建立缺氧缺糖模型,用光学显微镜观察细胞在缺氧缺糖后0.5、2、8、24h和48h 5个时间点的形态变化;2.AQP-4表达的检测:选取5h缺氧缺糖后0.5、2、8、24h和48h 5个时间点,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞AQP-4 mRNA的表达变化;用细胞免疫荧光染色法检测星形胶质细胞AQP-4蛋白表达变化。比较星形胶质细胞在5h缺氧缺糖后,其AQP-4的表达变化与细胞形态变化的相关性。结果1.星形胶质细胞细胞的培养,鉴定及缺氧缺糖水肿模型的建立:①光学显微镜下,原代成熟的星形胶质细胞成片生长,呈多边不规则形,有细长突起,细胞间连接紧密;②荧光显微镜下,GFAP细胞免疫荧光染色显示,星形胶质细胞GFAP染色呈阳性,细胞纯度>98%;③光学显微镜下:5h缺氧缺糖后,星形胶质细胞肿胀逐渐形成并继续加重,至2h时,肿胀达到高峰,此后肿胀逐渐消退,至48h时,细胞形态基本恢复正常;2.AQP-4表达变化的检测:①RT-PCR法检测发现:与正常组相比,缺氧缺糖组星形胶质细胞AQP-4 mRNA在5h缺氧缺糖后0.5h时表达先明显下降（P<0.05）,2h时有所回升（P>0.05）,在8h时超过正常水平,并达到最高值（P<0.05）,24h时有所下降（P<0.05）,但仍明显高于正常组水平,至48 h时表达基本恢复正常水平（P>0.05）。②细胞免疫荧光染色法发现:与正常组相比,缺氧缺糖组星形胶质细胞AQP-4蛋白在5h缺氧缺糖后的表达变化趋势与其mRNA表达变化趋势基本相同,在0.5h时表达先下降（P<0.05）,此后逐渐回升,并在8h时超过正常水平并达到最高值（P<0.05）,此后逐渐下降,至48h时基本恢复正常水平（P>0.05）。结论1.5h缺氧缺糖模型能引起星形胶质细胞明显水肿,恢复正常条件培养后2h细胞水肿达高峰,48h时水肿基本消退;2.在5h缺氧缺糖培养后星形胶质细胞水肿的整个过程中,AQP-4在细胞肿胀形成期表达降低,可能是保护性抑制此时细胞外水分过多地进入细胞内,AQP-4在细胞肿胀消退期表达升高,可能是保护性促进肿胀细胞内的水分向外排出,维持细胞正常的形态和功能。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：AQP-4 在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的作用
• 前言
• 第一部分 星形胶质细胞的培养、鉴定及缺氧缺糖水肿模型的建立
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二部分 AQP-4 在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的表达变化及作用探讨
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间撰写、发表的论文