酮基类胡萝卜素的检测、代谢研究及对HaCaT细胞紫外线损伤的作用

论文摘要

目的研究在装备了二极管阵列检测器（PDA）的高压液相色谱（HPLC）上,应用C18、C30柱子分离与鉴定酮基类胡萝卜素的方法;分析北京市场上的5种食用虾中酮基类胡萝卜素的含量与组成;探索酮基类胡萝卜素在大鼠体内器官以及血清中的积累情况;研究酮基类胡萝卜素对人角质形成细胞（HaCaT）增殖的影响;研究酮基类胡萝卜素在长波紫外线（UVA）和中波紫外线（UVB）照射后HaCaT细胞损伤中的防治作用。方法C18色谱柱为DiamonsilTM,流动相为酸性乙腈-水、乙酸乙酯,线性梯度洗脱,流速1.0 ml.min-1,检测波长480nm,波长范围280-580nm,进样量20μl;C30色谱柱为Waters YMC Carotenoid S-5,流动相酸性乙腈-水、甲基叔丁基醚,线性梯度洗脱,流速1.0ml.min-1,检测波长480nm,波长范围250nm-600nm,进样量20μl。酮基类胡萝卜素灌胃雄性SD大鼠后收集其血清、脏器及粪便,萃取其中的酮基类胡萝卜素组分,C30-HPLC-PDA对萃取物进行分离并测其几何异构体的组成。分别用一定剂量的UVA和UVB照射HaCaT细胞,立即加入含有酮基类胡萝卜素的培养基,继续培养24小时后检测细胞上清液中乳酸脱氢酶水平,通过MTT法检测细胞增殖情况,并与单照射UVA或UVB的对照组及未照UV也未加酮基类胡萝卜素的空白组进行比较。结果应用C18-HPLC-PDA和C30-HPLC-PDA酸性流动相中,酮基类胡萝卜素得到了良好的分离,可以利用此法鉴定酮基类胡萝卜素。虾青素单体在大鼠血清中及脾脏中均有积累。斑蝥黄质在大鼠体内的消化、吸收、血液运输和肝脏代谢中,未发现顺式异构体比例的上升。灌胃2小时后大鼠血清中斑蝥黄质的积累达到最高水平。酮基类胡萝卜素能显著提高HaCaT细胞的增殖率,能降低UV辐照后细胞上清液中的乳酸脱氢酶水平。结论通过比较色谱行为和光谱特征,酮基类胡萝卜素类化合物可被鉴定,这使C18-HPLC-PDA定量研究亦成为可能。应用C30-HPLC-PDA对酮基类胡萝卜素几何异构体进行检测具有可行性。酮基类胡萝卜素对紫外照射引起的HaCaT细胞的损伤具有保护作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.酮基类胡萝卜素
• 1.1 类胡萝卜素简介
• 1.2 虾青素
• 1.3 斑蝥黄质
• 2.酮基类胡萝卜素研究进展
• 2.1 分析与检测
• 2.2 动物体内代谢研究
• 2.3 生物学功能
• 3.皮肤光老化研究概况
• 3.1 紫外线对皮肤的伤害作用
• 3.2 皮肤光老化
• 3.3 活性氧簇
• 3.4 光保护药物
• 4.本实验的研究内容、目的和意义
• 4.1 主要研究内容
• 4.2 目的与意义
• 第2章 分析与检测
• 1.材料与方法
• 1.1 材料与试剂
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验方法
• 2.结果与分析
• 2.1 C18-HPLC-PDA分离与鉴定食品中虾青素
• 2.2 C30-HPLC-PDA分离与鉴定虾青素类化合物初探
• 2.3 食用虾中虾青素类化合物的含量和组成
• 2.4 虾青素类化合物的薄层层析法分离与检测
• 2.5 红球藻粉中虾青素类化合物的提取
• 3.讨论
• 3.1 红球藻粉中虾青素类化合物的提取
• 3.2 C18-HPLC-PDA分离与鉴定食品中虾青素
• 3.3 C30-HPLC-PDA分离与鉴定虾青素类化合物初探
• 3.4 食用虾中虾青素类化合物的含量和组成
• 3.5 虾青素类化合物的薄层层析法分离与检测
• 第3章 酮基类胡萝卜素在大鼠体内代谢初探
• 1.材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 材料与试剂
• 1.3 实验仪器
• 1.4 实验方法
• 2.结果与分析
• 2.1 虾青素在大鼠体内积累初探
• 2.2 斑蝥黄质分子在大鼠体内代谢中的构型变化研究
• 2.3 斑蝥黄质在大鼠血清中积累初探
• 3.讨论
• 3.1 虾青素在大鼠体内积累初探
• 3.2 斑蝥黄质分子在大鼠体内代谢中的构型变化研究
• 3.3 斑蝥黄质在大鼠血清中积累初探
• 第4章 酮基类胡萝卜素对HACAT细胞紫外线损伤的作用
• 1.材料与方法
• 1.1 细胞系
• 1.2 仪器与试剂
• 1.3 试剂配制
• 1.4 实验方法
• 2.结果与分析
• 2.1 UVA/UVB光损伤的形态学观察
• 2.2 MTT法检测细胞活性
• 2.3 乳酸脱氢酶（LDH）检测
• 2.4 细胞培养基中酮基类胡萝卜素分子的聚集
• 3.讨论
• 第5章 总结
• 1.结论
• 2.创新点
• 3.展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录:攻读硕士期间发表论文目录