胰岛素和胰岛素样生长因子系统及血管内皮生长因子在PCOS发病机制中的作用

论文摘要

我们应用氧化酶法、双抗体放射免疫法和酶标免疫吸附测定法测定PCOS组和对照组的血清及卵泡液中的Glu、Ins、IGF-1、VEGF及IGF-Ⅱ、VEGF水平;应用免疫组化的SP法测定Ir、IGF-1r、IGF-1、VEGF在PCOS组和对照组卵巢组织中的表达;应用原位杂交的方法测定IGF-1mRNA、VEGFmRNA在PCOS组和对照组卵巢组织中的表达;应用临床观察法观察临床指标。结果发现:1、PCOS组患者血清T、Ins、IGF-Ⅰ、VEGF、卵泡液VEGF水平均明显高于对照组,而卵泡液IGF-Ⅱ则低于对照组;PCOS患者黑棘皮征阳性组空腹Ins、T水平高于阴性患者,IGF-Ⅰ比值则低于阴性者;病例组内各指标间的相关性分析显示血清中Ins与Glu、血清中VEGF与Glu、血清中T与Ins、血清中VEGF与Ins间呈线性相关。2、免疫组化结果显示:Ir在卵巢组织各细胞成分包括卵泡颗粒细胞,卵泡膜细胞及间质细胞均有Ir表达。Ir主要集中表达于血管周围,在血管内皮细胞表达尤其丰富,在增生血管的表达更为明显;在各组切片均未见IGF-Ⅰr表达,IGF-Ⅰr主要表达于窦前卵泡,本实验所有8mm卵泡细胞成分中,均未得出免疫组化阳性结果,可能因IGF-Ⅰr表达甚微所致;IGF-Ⅰ在卵巢组织各细胞成分包括颗粒细胞、泡膜细胞表达,而间质细胞不表达,小卵泡颗粒细胞也可表达IGF-1。IGF-1在PCOS组颗粒细胞比正常组表达增高,而在泡膜细胞中的染色强度与对照组无显著差异;VEGF在卵巢组织各细胞成分包括颗粒细胞、泡膜细胞及间质细胞表达、基质细胞弱阳性表达、卵泡中卵泡液也有弱阳性表达,初级卵泡不表达或者卵泡部分细胞弱阳性表达,小动脉表达,小的毛细血管不表达。初级到次级卵泡的VEGF表达明显由弱到强,两级卵泡表达强度差异显著。PCOS组和对照组卵巢的颗粒细胞和间质细胞VEGF表达强度差异显著。泡膜细胞散在表达,随着卵泡发育,VEGF在卵泡膜细胞层,表达强度恒定,颗粒细胞层及卵泡中的表达逐渐增强。3.原位杂交结果显示:IGF-ⅠmRNA在颗粒细胞、泡膜细胞表达但间质细胞几乎不表达,在PCOS组比对照组颗粒细胞表达增高,而在泡膜细胞中的染色强度与对照组无显著差异,小卵泡颗粒细胞也可表达IGF-1mRNA;VEGFmRNA在颗粒细胞、泡膜细胞及间质细胞表达、细胞基质弱阳性表达、卵泡中卵泡液也有弱阳性表达,初级卵泡不表达或者卵泡部分细胞弱阳性表达,小动脉血管表达,小的毛细血管不表达。初级到次级卵泡的VEGFmRNA表达明显由弱到强,两级卵泡表达强度差异显著。PCOS组和对照组卵巢的颗粒细胞和间质细胞VEGFmRNA表达强度差异显著。泡膜细胞散在表达,随着卵泡发育,VEGFmRNA在卵泡膜细胞层,表达强度恒定,颗粒细胞层及卵泡中的表达逐渐增强。4.观察PCOS患者与糖脂代谢相关的临床资料显示:肥胖发生率63.15%（人群25%）,黑棘皮症阳性发生率47.37%,高血压发生率10.53%（人群11.26%）,高血脂发生率13.16%,高空腹血糖发生率18.42%,高空腹胰岛素发生率68.42%。在腹腔镜及手术中发现PCOS患者卵巢血管较正常妇女丰富。光镜下HE染色及电镜观察PCOS患者卵巢间质细胞/卵泡外膜细胞明显增生。本研究结果提示:1. PCOS组高空腹血清IGF-I、Ins、T,血清T水平与空腹血清Ins呈明显直线相关,空腹血清Ins与空腹血清Glu呈明显直线相关,PCOS患者体内升高的IGF-I可能通过竞争性结合了Ⅰr而未发挥与Ins同样的调节糖脂代谢的作用,进而参与了PCOS患者的胰岛素抵抗形成。严重的IR,严重高胰岛素血症可能导致黑棘皮征,IR、CHI和高T间可能存在互相促进的恶性循环。通过各种途径促进雄激素的合成和分泌,导致其卵泡发育障碍、优势卵泡选择受阻、大量小窦状卵泡积聚及排卵异常。2、PCOS组卵泡液IGF-Ⅱ水平低,血清Ins、IGF-Ⅰ水平高,通过各种途径促进雄激素的合成和分泌,导致其卵泡发育障碍、优势卵泡选择受阻、大量小窦状卵泡积聚及排卵异常在PCOS的发生及发展中起了重要作用。3.卵巢组织各细胞成分包括卵泡颗粒细胞,卵泡膜细胞及间质细胞均有Ir表达,卵巢受体表达均以Ir为主,且未发现有IGF-Ir表达,Ir主要集中表达于血管周围,在血管内皮细胞表达尤其丰富,在增生血管的表达更为明显,可推测卵巢是Ins作用的另一个靶器官,Ins和IGFs在卵巢主要通过与Ir结合而发挥作用并可能有刺激血管生成的作用,这一作用亦可能是Ins, IGFs促进PCOS发展的途径之一,表明Ins和Ir可能参与卵巢功能的调节,参与PCOS的发生及发展。4、在PCOS卵巢颗粒细胞IGF-1蛋白,IGF-1mRNA表达高,与有大量Ⅰr、IGF-Ⅰr的颗粒细胞结合使卵泡闭锁,停止发育,在PCOS的发生及发展中起了重要作用。5、PCOS组血清VEGF、卵泡液VEGF水平均明显高于正常对照组,血清VEGF水平与空腹血清Ins呈明显直线相关,PCOS组初级和次级卵泡VEGF蛋白、VEGFmRNA表达明显由弱到强,次级卵泡表达高,卵巢的颗粒细胞和间质细胞VEGF表达强。胰岛素可能增加VEGF基因的转录实现VEGF水平升高,VEGF可以促使增加卵巢间质血管化,卵泡周围血管生成,参与了PCOS的发生发展。6、PCOS患者与糖脂代谢相关的临床资料显示PCOS患者存在严重的糖脂代谢紊乱,间质增生,血管异常增生,这些与PCOS的卵巢形态改变和体征有关。

论文目录

• 缩略语表
• 文献综述
• 前言
• 第一章 胰岛素、胰岛素样生长因子和血管内皮生长因子在多囊卵巢综合征和正常对照组中血液及卵泡液中的浓度
• 实验流程
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第二章 胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体、胰岛素受体、血管内皮生长因子在多囊卵巢综合征和正常卵巢中的蛋白表达
• 实验流程
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 第三章 IGF-1mRNA、VEGFmRNA 在多囊卵巢综合征和正常卵巢中的表达
• 实验流程
• 材料与方法
• 实验结果
• 小结
• 讨论
• 结论
• 附表
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 发表文章
• 中文摘要
• ABSTRACT