肿瘤坏死因子在椎间盘退变中细胞凋亡的作用

论文摘要

研究设计：在因腰椎间盘突出而行手术所得的椎间盘标本与正常对照椎间盘标本间用免疫组化方法来研究凋亡分解产物PARP p85在退变椎间盘组织中的表达及TRAIL／DR4是否在突出椎间盘不同部位存在区域性分布。研究目的：明确肿瘤坏死因子超家族成员TRAIL／DR4是否在突出椎间盘不同部位表达及区域性分布，从而确定在突出椎间盘细胞中是否存在TRAIL／DR4诱导的细胞凋亡。研究背景：椎间盘退变的确切发病原因至今仍不能被完全阐明。体内和体外试验研究表明凋亡在椎间盘退变中起了很重要的作用。已发现了3种诱发细胞凋亡的死亡因子FasL，TNF-α及TRAIL，它们通过死亡诱导信号途径来促使细胞凋亡。尽管一些研究调查了人体椎间盘中凋亡机制的作用，但DR4，DR5等受体及其配体TRAIL能否在退变椎间盘细胞上表达及它们的结合是否能诱导椎间盘组织细胞凋亡尚没有得到证实。实验方法：60位患有腰椎间盘突出疾病伴或不伴有椎管狭窄症的病人中手术摘除椎间盘组织（试验组）及7例非正常死亡的身体健康且没有椎间盘突出家族史者（18岁25岁）体内获得的7个椎间盘组织（对照组），均包括纤维环，髓核及软骨终板。制成石蜡标本后切片，进行PARP p85，TRAIL及DR4的免疫组化检测，高倍镜视野下进行阳性细胞计数及细胞总数的计数，计算出阳性细胞所占的百分比，取其平均值，用作统计学分析。实验结果：实验组中，PARP p85，TRAIL及DR4在髓核，纤维环及软骨终板中表达率较高，其中，在髓核中表达最高，纤维环中最低。并且与椎间盘退变的程度呈正相关；阳性细胞表达与椎间盘退变的程度成正相关。而在对照组中，它们在三个部位的表达率显著降低，且分布稀疏。统计学结果显示PARP p85，TRAIL及DR4在退变椎间盘中的表达与正常对照椎间盘相比具有显著性差异。结论：肿瘤坏死因子超家族成员TRAIL及其受体DR4在退变椎间盘组织的不同部位存在着区域性分布，可以证实在退变椎间盘组织中存在着由TRAIL／DR4诱导的第三种凋亡途径。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料和方法
• 1.1 临床资料
• 1.2 椎间盘组织标本
• 1.2.1 取材
• 1.2.2 标本的固定
• 1.2.3 石蜡切片
• 1.3 免疫组化研究
• 1.3.1 PARP试验
• 1.3.1.1 半胱天冬酶底物PARP的裂解
• 1.3.1.2 PARP实验的步骤
• 1.3.2 DR4和TRAIL的检测
• 1.3.2.1 DR4的检测步骤
• 1.3.2.2 TRAIL的检测步骤
• 1.3.3 观察结果的评价
• 1.3.3.1 PARP实验
• 1.3.3.2 DR4实验
• 1.3.3.3 TRAIL实验
• 1.4 统计学分析
• 1.5 实验材料及设备
• 1.5.1 常规溶液及缓冲液
• 1.5.2 免疫组化实验的仪器设备及试剂
• 第二章 结果
• 2.1 临床资料
• 2.2 组织学
• 2.3 免疫组织实验
• 2.3.1 PARP实验
• 2.3.2 DR4实验
• 2.3.3 TRAIL实验
• 第三章 讨论
• 3.1 生物体的细胞凋亡
• 3.2 椎间盘的细胞凋亡
• 3.2.1 正常椎间盘的细胞凋亡
• 3.2.2 退变椎间盘的细胞凋亡
• 3.3 椎间盘细胞凋亡的诱导途径
• 3.3.1 FasL/Fas途径
• 3.3.2 TNF-R1/TNF-α途径
• 3.3.3 TRAIL/DR4,DR5途径
• 3.4 TNF-α在椎间盘退变及腰背痛中的作用
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 致谢