林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究

论文摘要

林荫银莲花（Anemone flaccida Fr. Schmidt）属银莲花属（Anemone）,以其干燥根茎入药,俗称地乌,具有祛风湿、助筋骨、消肿止痛等功效,开发意义巨大。在自然条件下林荫银莲花生长期短,生物量小,种子发芽困难,野生资源有限,急需实现人工栽培。本研究针对其种质资源缺乏的问题,以无菌苗叶片为外植体建立了离体叶的再生体系,并初步探讨了多倍体种质培育的方法。主要研究结果如下：（1）以根茎上萌发的芽为材料,用不同浓度秋水仙素（colchicine）作为诱导剂,采用棉球包裹处理,然后栽培到土壤中观察形态结构变化。结果表明,以0.2%浓度秋水仙素处理根茎萌发芽8d的诱导率最高,达81.67%,且死亡率低,是诱导多倍体材料的可行方法。（2）以根茎萌发芽为材料,消毒后在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖培养基上培养,然后转移到MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.5 mg/L KT+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上继代培养,再以不同浓度秋水仙素采用点滴法和浸泡法处理再生芽。结果表明,多倍体诱导率很低,最高诱变率仅达13%左右,且死亡率高,最高达81.7%。（3）再生芽离体叶片在添加不同浓度组合的细胞分裂素类物质6-BA与生长素类NAA的MS基本培养基上,并在光照和黑暗两种条件下培养,观察对外植体诱导、分化的影响。结果表明,在所有处理中均无愈伤组织产生,而是直接从叶片外植体上再生小芽；以在MS+1.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖培养基上黑暗条件下培养的再生芽诱导率最高,达21.67%。光照虽对叶片外植体再生芽的诱导有一定影响,但对再生小芽数目影响不大。（4）以添加不同浓度组合的2,4-D与6-BA的MS为培养基,并在黑暗和光照两种条件下培养,结果显示,叶片外植体仍未被诱导产生愈伤组织,而是直接再生出小芽；在黑暗条件下,以MS+2.5 mg/L6-BA+0.2 mg/L 2,4-D+0.8%琼脂+3%蔗糖培养基的再生芽诱导率最高,可达28.33%；有光照条件下,再生芽诱导率略低,但对单个叶片外植体上再生芽数影响不大。（5）在MS基本培养基中添加0.1 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L NAA与不同浓度6-BA组合,并在黑暗和光照两种条件下培养叶片外植体,结果表明,在黑暗条件下,以MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA+0.8%琼脂+3%蔗糖为培养基的再生芽诱导率最高,可达32.78%,是目前叶片再生芽诱导的最佳培养基。光照对初代再生芽的诱导仍有影响,但对再生小芽数量影响不大。（6）将叶片再生小芽继代培养4次后,去除丛生芽上的大叶片,保留新生叶,接种到1/2MS+1.0 mg/LNAA+0.8%琼脂+3%蔗糖的生根培养基中,分别在室温（19±2℃）光照、室温（19±2℃）黑暗及4℃黑暗下培养。结果表明,在4℃黑暗下培养生根率最高,可达70%。待根生长至0.5cm长度后,转入光下培养,可培育出健壮幼苗。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 1 前言
• 1.1 林荫银莲花研究概况
• 1.1.1 林荫银莲花植物学特征及分布
• 1.1.2 林荫银莲花的药用价值
• 1.1.3 林荫银莲花的繁殖
• 1.2 药用植物育种
• 1.2.1 药用植物育种的特点
• 1.2.2 药用植物的育种方法
• 1.3 药用植物多倍体育种
• 1.3.1 药用植物多倍体的生物学特性变化
• 1.3.2 诱导植物多倍体的途径与方法
• 1.3.3 药用植物多倍体的鉴定方法
• 1.3.4 药用植物多倍体育种展望
• 1.4 组织与细胞培养在药用植物中的应用
• 1.4.1 体细胞突变体的产生、筛选和应用
• 1.4.2 在育种上的应用
• 1.4.3 离体培养技术应用
• 1.5 离体叶培养
• 2 研究的内容、目的和意义
• 2.1 研究方案、技术路线
• 2.1.1 研究方案
• 2.1.2 技术路线
• 3 林荫银莲花多倍体的诱导
• 3.1 试验材料及培养
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 无菌芽的培养
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 试验设计
• 3.2.2 试剂的配制
• 3.2.3 根茎点滴法处理
• 3.2.4 无菌芽点滴法处理
• 3.2.5 无菌芽浸泡法处理
• 3.2.6 多倍体的扩繁、生根和移栽
• 3.2.7 多倍体的鉴定
• 3.2.8 统计方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 根茎点滴法处理诱导
• 3.3.2 无菌芽点滴法诱导试验
• 3.3.3 无菌芽浸泡法处理试验
• 3.4 讨论
• 3.4.1 多倍体诱导方法的选择
• 3.4.2 秋水仙素诱导多倍体的处理浓度和时间
• 3.4.3 多倍体嵌合体与纯化
• 3.5 小结
• 3.6 展望
• 4 林荫银莲花叶片离体快繁
• 4.1 试验材料
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 实验设计
• 4.2.2 培养方法
• 4.2.3 统计方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 NAA和6-BA对叶片诱导的影响
• 4.3.2 2,4-D和6-BA对叶片诱导的影响
• 4.3.3 NAA、2,4-D和6-BA对叶片分化的影响
• 4.3.4 不同培养条件对生根的影响
• 4.4 讨论
• 4.4.1 离体快繁中外植体的污染问题
• 4.4.2 植物生长调节剂对叶片外植体再生芽诱导的影响
• 4.4.3 再生途径的探讨
• 4.4.4 培养条件对再生芽诱导的影响
• 4.5 结论
• 4.6 展望
• 5 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 附1
• 附2