论文题目: 儿茶酚胺类激素对THP-1细胞泡沫化的影响及其机理的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 田英
导师: 傅明德
关键词: 儿茶酚胺,泡沫细胞,胆固醇流出,基因表达,肾上腺素能受体,高脂血症,脂蛋白酯酶,亚类,限制性片段长度多态性,型高脂血症,载脂蛋白,高密度脂蛋白亚类
文献来源: 四川大学
发表年度: 2005
论文摘要: 第一部分 心血管系统是心理应激的靶目标,伴有运动诱导的心肌缺血,血压升高,心率增加,心律不齐,动脉粥样硬化的发展,以及死亡。最近的资料指出在下丘脑,垂体腺,肾上腺髓质和交感神经末端之间存在相互作用如同对应激的神经内分泌反应。心理应激导致细胞机能障碍的机制了解甚少,在动脉粥样硬化中表达上调的多种基因,也可被心理应激诱导,精神应激导致细胞功能失调并最终导致心血管疾病的更多的下游信号仍然大部分都未知。 目的:观察儿茶酚胺类激素对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞泡沫化和细胞内胆固醇流出的影响。同时观察儿茶酚胺类激素对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞TGF-β1、CD36、SR-AⅠ、ABCA1、Caveolin-1基因表达的影响。初步了解儿茶酚胺类激素影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞功能的细胞信号转导途径。 方法:运用高效液相色谱检测细胞内总胆固醇和游离胆固醇的含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,逆转录-多聚酶链式反应检测TGF-β1、CD36、SR-AⅠ、ABCA1、Caveolin-1 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验检测TGF-β1、Western印迹检测SR-AⅠ和ABCA1蛋白的表达。 结果:不同浓度的去甲肾上腺素(10 nmol/L～10μmol/L)作用THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24小时。结果显示,1μmol/L和10μmol/L去甲肾上腺素处理后,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯明显增加,呈剂量和时间依赖性(p<0.05)。而apoA-Ⅰ介导的细胞内胆固醇流出呈时间依赖性减少(p<0.05)。100nmol/L及1μmol/L的肾上腺素作用THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后,其TGF-β1、ABCA1 mRNA水平下降(p<0.01;p<0.05),SR-AⅠmRNA水平升高(p<0.05)。100 nmol/L,1μmol/L及10μmol/L的去甲肾上腺素作用THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后,其TGF-β1、ABCA1 mRNA和蛋白水平下降(p<0.05);1μmol/L及10μmol/L的去甲肾上腺素则升高SR-AⅠmRNA和蛋白的水平(p<0.05)。而肾上腺素和去甲肾上腺素作用细胞后对CD36和Caveolin-1基因表达无影响(p>0.05)。为了解去甲肾上腺素影响TGF-β1、SR-AⅠ
论文目录:
中文摘要
英文摘要
第一部分 儿茶酚胺类激素对THP-1细胞泡沫化的影响及其机理的研究
前言
1 实验材料
2 实验方法
2.1 THP-1细胞的培养及分化
2.2 低密度脂蛋白的制备、修饰及鉴定
2.3 细胞内胆固醇流出检测
2.4 细胞内胆固醇的检测
2.5 油红O染色和脂质染色的半定量
2.6 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立
2.7 细胞总RNA的提取、定量和RNA的完整性分析
2.8 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
2.9 ELISA法检测细胞TGF-β1蛋白表达
2.10 western-blot印迹法检测SR-AⅠ和ABCA1蛋白的表达
2.11 统计学处理
3 结果
3.1 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型
3.2 儿茶酚胺类激素对THP-1巨噬细胞泡沫化的影响
3.3 肾上腺素对TGF-β1、CD36、SR-AⅠ、ABCA1、Caveolin-1 mRNA表达的影响
3.4 去甲肾上腺素对TGF-β1、CD36、SR-AⅠ、ABCA1、Caveolin-1表达的影响
3.5 肾上腺素能受体拮抗剂对去甲肾上腺素相关作用的影响
4 讨论
结论
第二部分 高脂血症患者HDL亚类组成与脂蛋白酯酶基因内含子8HindⅢ多态性的关系
前言
1 材料
2 实验方法
2.1 血脂与载脂蛋白的测定
2.2 HDL免疫印迹实验
2.3 LPL基因多态性分析
2.4 统计学方法
3 结果
3.1 LPL基因分型
3.2 高脂血症组
4 讨论
结论
第三部分 Ⅳ型高脂血症患者HDL亚类组成与载脂蛋白E基因多态性关系的研究
前言
1 对象和方法
2 结果
2.1 apoE基因型和等位基因频率分布
2.2 血脂、载脂蛋白水平与HDL亚类组成与含量
2.3 不同apoE基因型血脂、载脂蛋白以及HDL亚类含量
3 讨论
结论
参考文献
文献综述
心理应激在心血管病发生中的病理生理机制
高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化作用与细胞信号转导通路
在读期间科研成果简介
论文内容独创性声明
致谢
发布时间: 2005-10-08
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